Родился 6 ноября 1977 года в городе Кимовск Тульской области. В 1994 году с отличием окончил среднеобщеобразовательную школу и бизнес-лицей по специальности «Менеджер», поступил в Московскую государственную академию ветеринарной медицины и биотехнологии имени К.И. Скрябина.

Трудовой путь начал в 1993 году в тульском отделении «Мосбизнесбанка» на должности бухгалтера-операциониста. Продолжил в сельскохозяйственном предприятии - АОЗТ «Шелепино» Алексинского района Тульской области. Параллельно с учебой в академии работал в государственном сельскохозяйственном предприятии «Тульское» по племенной работе ветеринарным фельдшером, затем - ветеринарным врачом. В 1997-1998 годах работал на Московском мясокомбинате «Микомс», в 1999 году - в сельскохозяйственном производственном кооперативе «Виктория» на должности ветеринарного врача.

В 2000 году с отличием окончил ветеринарный факультет и поступил в аспирантуру на кафедру клинической диагностики и болезней молодняка сельскохозяйственных животных. В том же году принят на должность ассистента этой кафедры. В 2003 году успешно защитил диссертацию на соискание ученой степени кандидата биологических наук, переведен на должность старшего преподавателя кафедры и назначен заместителем декана факультета ветеринарной медицины. С 2004 года - доцент академии, 26 марта 2006 года Пименову Н.В. присвоено ученое звание доцента.

24 декабря 2012 г. защитил диссертацию с присвоением ученой степени доктора биологических наук по специальностям: 03.01.06 - биотехнология (в том числе бионанотехнологии), 06.02.02 - ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология, микология с микотоксикологией и иммунология. Большая часть научных исследований Пименова Н.В. посвящена лечению и профилактике болезней птиц, в т.ч. общих для животных и человека. Среди публикаций Пименова Н.В. - работы, посвященные совершенствованию гематологического анализа и фаготерапии в практике ветеринарной медицины, диагностике и лечению панкреатитов, болезней печени и мочевыделительной системы у мелких домашних животных, экологии и санитарной безопасности. Изданы более 200 научных и методических работ, в т.ч. 2 учебника, 12 учебных пособий, 1 монография, 7 программ. Получено 3 патента на изобретение. Под руководством Пименова Н.В. защищены 2 диссертации кандидата биологических наук, под редакцией изданы 10 сборников научных трудов, достигнуты победы во Всероссийских и международных конкурсах на лучшую научную работу среди студентов, а также среди аспирантов и молодых ученых.

Пименов Н.В. разработал, сконструировал и внедрил в практику ветеринарной медицины вакцину против сальмонеллеза голубей и вакцину «Виросальм» ассоциированную инактивированную против сальмонеллеза и болезни Ньюкасла голубей и декоративных птиц, препараты бактериофаг тифимуриум и бивалентный бактериофаг, метод селективной деконтаминации для лечения сальмонеллеза и других энтеробактериальных инфекций животных. Авторская вакцина «Виросальм» зарегистрирована и сертифицирована на территории Российской Федерации, является единственной отечественной вакциной против сальмонеллеза голубей, попугаев, фазанов и других птиц.

С 2003 по 2013 годы Пименов Н.В. возглавлял совет молодых ученых Московской государственной академии ветеринарной медицины и биотехнологии имени К.И.Скрябина. С 2003 года являлся членом правления Ассоциации советов молодых ученых аграрных вузов, преобразованной во Всероссийский совет молодых ученых и специалистов аграрных образовательных и научных учреждений (ВСМУиС) в 2007 году, где стал заместителем председателя. Избран председателем ВСМУиС 21 сентября 2012 года.

Является членом редакционного совета газеты «К Знаниям», журнала «Russian Journal of Agricultural and Socio-Economic Sciences», сборника трудов Всероссийского совета молодых ученых и специалистов аграрных образовательных и научных учреждений, членом ученого совета факультета, диссертационного совета, общественного совета молодых ученых при Префекте, учебно-воспитательных, аттестационных, административных комиссий, председателем участковой избирательной комиссии.

В 2002 году являлся персональным стипендиатом Президента Российской Федерации, в 2011 году номинирован на Премию Президента Российской Федерации молодым ученым в области науки и инноваций. Награжден медалью Министерства образования РФ, Почетной Грамотой Министерства сельского хозяйства РФ за большой вклад в подготовку высококвалифицированных специалистов для аграрного комплекса, нагрудным знаком Министерства образования и науки РФ «За развитие научно-исследовательской работы студентов», Почетной грамотой Губернатора Владимирской области, двумя медалями органа власти «За доблестный труд», грамотами и благодарственными письмами статс-секретаря заместителя Министра сельского хозяйства РФ, Префекта Юго-Восточного административного округа г. Москвы, директора Департамента научно-технологической политики и образования МСХ РФ, генерального директора ассоциации аграрных вузов «Агрообразование» и другими.

За развитие образовательной, научной и научно-технической деятельности, а также большой вклад в повышение эффективности агропромышленного производства, качества и конкурентоспособности выпускаемой продукции в 2012 году Пименов Николай Васильевич удостоен звания «Почетный работник агропромышленного комплекса России».

ФИО:
Должность: Профессор кафедры биологии и патологии мелких домашних, лабораторных и экзотических животных.
Специализация: Ветеринарная офтальмология

Основные вехи жизни связанные с ветеринарной практикой:
Копенкин Е. П. — один из основоположников ветеринарной офтальмологии в России, — ведущий ученый и педагог в области ветеринарной офтальмологии и хирургии. Более чем 37 лет участвует в подготовке ветеринарных врачей для сельскохозяйственного производства, отличается высоким профессионализмом, педагогическим мастерством, творческим, новаторским подходом к совершенствованию методики преподавания ветеринарной офтальмологии и хирургии, ученый и педагог высокой квалификации, умело сочетает достижения науки и практики в преподавании студентам, курсантам ФПК, подготовке и изданию научной и учебно-методической литературы. Им опубликовано 152 научные и учебно-методические работы, включая Государственный образовательный стандарт, учебные программы, фундаментальные учебники и справочники по общей ветеринарной хирургии (1 ), болезням мелких домашних животных (10 ), монографии по болезням глаз собак и кошек (12 ), доклады на международных конгрессах. Копенкиным Е. П. создана научная школа по новому направлению в ветеринарной хирургии - офтальмологии. Научные разработки посвящены изучению этиологии, патогенеза, диагностике, лечению и профилактике болезней глаз у крупного рогатого скота, лошадей и мелких домашних животных. В этом направлении под его руководством и консультацией работает большой коллектив научных работников, успешно защищаются кандидатские и докторские диссертации. В настоящее время он руководит работой 6 аспирантов. Он соавтор одного авторского свидетельства и пяти патентов, одного рационализаторского удостоверения и наставления по применению глазных лекарственных пленок у домашних животных, которые имеют широкое народно-хозяйственное значение для страны, имеет свидетельство участника ВДНХ СССР по внедрению глазных лекарственных пленок при лечении и профилактике инфекционных болезней глаз у крупного рогатого скота. За научный вклад в развитие ветеринарной медицины мелких домашних животных профессор Е.П. Копенкин является лауреатом премии «Золотой скальпель» 2000 года, неоднократно награждался дипломами и благодарственными письмами как руководитель научных студенческих работ, две из которых отмечены медалями Всероссийского конкурса «За лучшую научную студенческую работу». Е.П. Копенкин является широко известным ученым, членом Европейского общества ветеринарных офтальмологов, выступал с докладом на XXI Всемирном ветеринарном конгрессе в Москве. В настоящее время Е. П. Копенкин принимает участие в доклинических и клинических исследованиях препаратов группы SkQ (глазные капли «Ветомитин » ).

Научные статьи:
152 научные статьи, в том числе в международных изданиях.

ФИО:
Должность: Профессор кафедры биологии и патологии мелких домашних, лабораторных и экзотических животных
Ученая степень: Доктор ветеринарных наук
Специализация: Ветеринарная офтальмология, герпетология

Сотникова Л. Ф. работает в ФГОУ ВПО МГАВМиБ имени К. И. Скрябина с 1987 года. Работа Сотниковой Л. Ф. посвящена изучению одной из фундаментальных задач современной ветеринарной офтальмологии - болезни сетчатки и сосудистой оболочки животных. Сотникова Л. Ф. доктор ветеринарных наук, профессор кафедры биологии и патологии мелких домашних, лабораторных и экзотических животных, член Европейской ассоциации ветеринарных офтальмологов, регулярно принимает участие в международных конференциях, посвященных болезням глаз мелких домашних животных и лошадей. Сотникова Л. Ф. автор 46 научных работ, учебников и учебных пособий, посвященных проблемам ветеринарной офтальмологии и опубликованных в ведущих ветеринарных изданиях, таких как журнал «Ветеринария », журнал «Ветеринарная медицина» и др. Также имеет 6 патентов на изобретение (№ /№ : 2223756, 2222206, 2228742, 2228741, 2223755 - Способ лечения ре

цидивирующего иридоциклита лошадей), выданные Российским агентством по патентам и товарным знакам. Ежегодно приглашается для чтения лекций во всероссийский научно-исследовательский институт коневодства по болезням глаз лошадей. Под её руководством были защищено две кандидатские диссертации, посвященные актуальным проблемам ветеринарной офтальмологии. В настоящее время Л. Ф. Сотникова принимает участие в доклинических и клинических исследованиях препаратов группы SkQ (глазные капли «Ветомитин » ). В частности, Л. Ф. Сотниковой проводится изучение влияния капель SkQ на сетчатку глаза животных посредством методов электроретинографии и ретинофотографии.

Научные статьи:
46 научных статей, в том числе в международных изданиях

Кабинет приёма: Клинический корпус, кабинеты № : 64, 66

ФИО:
Должность: профессор кафедры биологии и патологии мелких домашних, лабораторных и экзотических животных
Ученая степень: Доктор ветеринарных наук, доктор биологических наук.
Специализация: ветеринарная микробиология, болезни голубей и других птиц.

В 2000 году с отличием окончил ветеринарный факультет и поступил в аспирантуру на кафедру клинической диагностики и болезней молодняка. В 2003 году успешно защитил диссертацию на соискание ученой степени кандидата биологических наук, работал старшим преподавателем кафедры, заместителем декана факультета ветеринарной медицины. С 2004 года - доцент кафедры клинической диагностики и болезней молодняка.
24 декабря 2012 г. защитил диссертацию с присвоением ученой степени доктора биологических наук по специальностям: 03.01.06 - биотехнология (в том числе бионанотехнологии), 06.02.02 - ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология, микология с микотоксикологией и иммунология. Большая часть научных исследований Пименова Н. В. посвящена лечению и профилактике болезней птиц, в т.ч. общих для животных и человека. Среди публикаций Пименова Н. В. - работы, посвященные совершенствованию гематологического анализа и фаготерапии в практике ветеринарной медицины, диагностике и лечению панкреатитов, болезней печени и мочевыделительной системы у мелких домашних животных, экологии и санитарной безопасности. Изданы более 100 научных и методических работ, в т.ч. 2 учебника, 12 учебных пособий, 1 монография, 7 программ. Получено 3 патента на изобретение. Под руководством Пименова Н. В. защищены 2 диссертации кандидата биологических наук, под редакцией изданы 10 сборников научных трудов, достигнуты победы во Всероссийских и международных конкурсах на лучшую научную работу.
Пименов Н. В. разработал, сконструировал и внедрил в практику ветеринарной медицины вакцину против сальмонеллеза голубей и вакцину «Виросальм » ассоциированную инактивированную против сальмонеллеза и болезни Ньюкасла голубей и декоративных птиц, препараты бактериофаг тифимуриум против сальмонеллеза голубей и бивалентный бактериофаг, метод селективной деконтаминации для лечения сальмонеллеза и других энтеробактериальных инфекций животных. Авторская вакцина «Виросальм » зарегистрирована и сертифицирована на территории Российской Федерации, является единственной отечественной вакциной против сальмонеллеза голубей, попугаев, фазанов и других птиц.
Награжден медалью Министерства образования РФ, Почетной Грамотой Министерства сельского хозяйства РФ за большой вклад в подготовку высококвалифицированных специалистов для аграрного комплекса, нагрудным знаком Министерства образования и науки РФ «За развитие научно-исследовательской работы студентов», почетным званием «Почетный работник агропромышленного комплекса России».

ФИО:
Должность: доцент, ветеринарный врач-офтальмолог

Специализация:

Сароян С. В. работает в ФГОУ ВПО МГАВМиБ имени К. И. Скрябина с 2005 года. С 1999 года занимается офтальмологией. Его работа посвящена изучению этиологии, патогенеза и лечения увеитов собак и кошек , болезням сетчатки, большое внимание уделяется проведению микрохирургических операций на глазах у собак и кошек. В 2002 году награжден дипломом 2-ой степени за активное участие и научный доклад по лечению глаукомы, в 2004 году награждён дипломом 3-ей степени за активное участие и научный доклад по диагностике и лечению увеитов собак. Сароян С. В. автор 17 научных работ и методических указаний по диагностике и лечению увеитов собак, представленных на Российских и международных конференциях и опубликованных в ведущих отечественных научных журналах таких, как «Ветеринария », «Ветеринарная медицина“ и др. Является соавтором одного учебника по ветеринарной офтальмологии. В 2008 году им подготовлена кандидатская диссертация на тему “ Клинико-морфологическая характеристика, диагностика и лечение увеитов собак». Сароян С. В. принимал участие в международном семинаре по микрохирургии глаза мелких домашних животных. В 2007 году получил сертификат Европейской ассоциации Ветеринарных Офтальмологов о прохождении курса по микрохирургии глаза мелких домашних животных. В 2007 году был также получен диплом за отличный доклад и активное участие во 2-ой Всероссийской Ветеринарной Конференции «Ветеринарная медицина - теория, обучение, практика». Сароян С. В. является руководителем научно-студенческого общества кафедры биологии и патологии мелких домашних, лабораторных и экзотических животных. В настоящее время Сароян С. В. принимает участие в доклинических и клинических исследованиях препаратов группы SkQ (глазные капли «Ветомитин » ). В частности, Сарояном С. В. проводится изучение влияния капель SkQ на сетчатку глаза животных посредством методов электроретинографии и ретинофотографии посредством методов электроретинографии и ретинофотографии.

Награды:
1. Диплом 2-ой степени за активное участие и научный доклад по лечению глаукомы.
2. Диплом 3-ей степени за активное участие и научный доклад по диагностике и лечению увеитов собак.
3. Сертификат Европейской ассоциации Ветеринарных Офтальмологов.
4. Диплом за отличный доклад и активное участие во 2-ой Всероссийской Ветеринарной Конференции «Ветеринарная медицина - теория, обучение, практика».

Научные статьи:
17 научных статей, 1 методические указания

Кабинет приёма: Клинический корпус, кабинеты № 64, 66

ФИО:
Должность: доцент, ветеринарный врач-офтальмолог кафедры биологии и патологии мелких домашних, лабораторных и экзотических животных
Ученая степень: кандидат ветеринарных наук
Специализация: Ветеринарная офтальмология, микрохирургия глаза

Комаров С. В. работает в ФГОУ ВПО МГАВМиБ имени К. И. Скрябина с 2004 года. Начал заниматься офтальмологией в 2000 году. Его работа посвящена изучению патологии сетчатки и сосудистого тракта собак и кошек. Также большое внимание уделяет проведению блефаропластических операций у собак. В настоящее время Комаров С. В. принимает участие в доклинических и клинических исследованиях препаратов группы SkQ (глазные капли «Ветомитин » ). В частности, Комаровым С. В. проводится изучение влияния капель SkQ на сетчатку глаза животных посредством методов электроретинографии и ретинофотографии посредством методов электроретинографии и ретинофотографии.

Научные статьи:
Комаров С. В. автор 9 научных статей по блефаропластике собак, опубликованных в журналах «Ветеринария » и «Ветеринарная медицина». Является соавтором одного учебника по ветеринарной офтальмологии.

Кабинет приёма: Клинический корпус, кабинеты № 64, 66

ФИО:
Должность: Ветеринарный врач-терапевт кафедры биологии и патологии мелких домашних, лабораторных и экзотических животных

Специализация: Ветеринарная терапия, гомеопатия, дерматология

В 1981 году закончила Московскую ветеринарную академию. После окончания академии работала младшим научным сотрудником лаборатории обмена веществ.
С 1986 по 1989 год учеба в аспирантуре кафедры внутренних незаразных болезней.
С 1989 по 1998 год работала в должности начальника зооветеринарного отдела всероссийского общества защиты животных и ветеринарным врачом биоцентра «Сопико »
С 1998 года работает в Московской ветеринарной академии на кафедре биологии и патологии мелких домашних, лабораторных и экзотических животных.

Научные статьи:
33 научные статьи, учебные пособия

Кабинет приёма: Клинический корпус, кабинет № 71

ФИО:

Специализация: Ветеринарная терапия, гомеопатия, стоматология

Волкова Е. В. работает в ФГОУ ВПО МГАВМиБ имени К. И. Скрябина с 2001 года. Основное направление деятельности лечение и профилактика нехирургических патологий мелких домашних и лабораторных животных.

Кабинет приёма: Клинический корпус кабинет № 71

ФИО:
Должность: Ветеринарный врач кафедры биологии и патологии мелких домашних, лабораторных и экзотических животных
Ученая степень: Кандидат ветеринарных наук, доцент
Специализация: УЗИ, Полостная хирургия.

Арсланян Г. Г. работает в ФГОУ ВПО МГАВМиБ имени К. И. Скрябина с 1983 года. С 1994г. по 1997г. работал ветеринарным врачом на скорой ветеринарной помощи на Центральной станции ул. Юннатов д.16.

Научные статьи:
20 научных статей, методические указания.

Кабинет приёма: Клинический корпус, кабинет № 70

ФИО:

Должность: Ветеринарный врач кафедры биологии и патологии мелких домашних, лабораторных и экзотических животных
Специализация: Ветеринарная хирургия

Филиппенкова А. Г. работает в ФГОУ ВПО МГАВМиБ имени К. И. Скрябина с 2004 года. Основное направление деятельности абдоминальная хирургия, травматология. Является аспиранткой кафедры ветеринарной хирургии, работает над темой патологических переломов у мелких пород собак.

Разработка средств и совершенствование методов лечения и профилактики сальмонеллеза птиц

-- [ Страница 1 ] --

МИНИСТЕРСТВО СЕЛЬСКОГО ХОЗЯЙСТВА РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ

Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение

высшего профессионального образования

«Московская государственная академия ветеринарной медицины

и биотехнологии имени К.И.Скрябина»

На правах рукописи

ПИМЕНОВ НИКОЛАЙ ВАСИЛЬЕВИЧ

РАЗРАБОТКА СРЕДСТВ И СОВЕРШЕНСТВОВАНИЕ

МЕТОДОВ ЛЕЧЕНИЯ И ПРОФИЛАКТИКИ

САЛЬМОНЕЛЛЕЗА ПТИЦ

03.01.06 – БИОТЕХНОЛОГИЯ (В ТОМ ЧИСЛЕ БИОНАНОТЕХНОЛОГИИ), 06.02.02 – ВЕТЕРИНАРНАЯ МИКРОБИОЛОГИЯ, ВИРУСОЛОГИЯ,

ЭПИЗООТОЛОГИЯ, МИКОЛОГИЯ С МИКОТОКСИКОЛОГИЕЙ

И ИММУНОЛОГИЯ

Диссертация на соискание ученой степени доктора биологических наук

Научный консультант : доктор ветеринарных наук, профессор Субботин Владимир Викторович Москва,

Стр.

ВВЕДЕНИЕ

1.

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

2. Этиологические особенности сальмонеллеза птиц 2.1. Характеристика возбудителя 2.1.1. Сохранность возбудителя 2.1.2. Резистентность к антибиотикам 2.1.3. Факторы патогенности сальмонелл 2.1.4. Эпизоотологические данные 2.1.5. Патогенез 2.1.6. Клинико-патоморфологические характеристики и 2.2.

диагностика сальмонеллеза птиц Клинические признаки 2.2.1. Патологоанатомические изменения 2.2.2. Лабораторная диагностика 2.2.3. Средства и методы лечения и профилактики 2.3.

сальмонеллеза птиц Принципы противоэпизоотической работы с птицепоголовьем, неблагополучным по сальмонеллезу Лечебные мероприятия при сальмонеллезе птиц 2.3.2. Профилактика сальмонеллеза птиц 2.3.3.

СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

3. Материалы и методы 3.1. Результаты собственных исследований 3.2. Этиологический профиль сальмонеллеза птиц 3.2.1. Характеристика изолятов сальмонелл 3.2.2. Антибиотикорезистентность возбудителей сальмонеллеза 3.

2.3. Определение наиболее вирулентных изолятов сальмонелл 3.2.4. Определение наиболее иммуногенных изолятов сальмонелл 3.2.5. Исследование вирулентности и иммуногенности производственных штаммов сальмонелл для голубей Изготовление вакцины инактивированной полиэтиленгликолевой против сальмонеллеза голубей Определение оптимальной иммунизирующей дозы вакцины 3.2.10. Изучение безвредности и ареактогенности готового образца вакцины инактивированной полиэтиленгликолевой против 3.2.11. Доказательство отсутствия потенциальных рисков для человека и окружающей среды 3.2.12. Эффективность применения вакцины инактивированной полиэтиленгликолевой против сальмонеллеза голубей в остром 3.2.13. Испытания вакцины инактивированной полиэтиленгликолевой против сальмонеллеза голубей в условиях голубятен 3.2.14. Селекция и изучение биологических свойств высокоактивных бактериофагов к S. typhimurium 3.2.15. Отбор производственных штаммов бактериофагов, изучение 3.2.16. Создание бактериофагового препарата 3.2.17. Создание бивалентного бактериофага против 3.2.18. Эффективность метода селективной деконтаминации с использованием бактериофагов и пробиотика лактобифадол 3.2.19. Создание вакцины «Виросальм» ассоциированной инактивированной против сальмонеллеза и болезни Ньюкасла птиц 3.2.19а. Обоснование необходимости создания и применения вакцины ассоциированной инактивированной против сальмонеллеза 3.2.19б. Приготовление питательной среды для культивирования 3.2.19ж. Получение вируссодержащей эмбриональной жидкости 3.2.20. Исследования по безопасности рекомендуемой прививочной дозы при передозировке и повторном введении вакцины 3.2.21. Изучение антигенных и иммуногенных свойств вакцины 3.2.22. Изучение стабильности при хранении вакцины «Виросальм» 3.2.23. Эффективность применения вакцины «Виросальм»

3.2.22а. Применение вакцины «Виросальм» на голубях, курах, утках, гусях и индейках в условиях КФХ «Барбасов» НароФоминского района Московской области 3.2.22в. Применение вакцины «Виросальм» на голубях в условиях частных голубятен Западного административного округа города 3.2.22г. Применение вакцины «Виросальм» на индоутках, утках, гусях, цесарках и индейках в условиях индивидуальных подсобных хозяйств деревни Мошок Гусевского района Владимирской 3.2.23. Схема лечебно-профилактических мероприятий,

ОБСУЖДЕНИЕ ПОЛУЧЕННЫХ

ВЫВОДЫ

СВЕДЕНИЯ О ПРАКТИЧЕСКОМ ИСПОЛЬЗОВАНИИ РЕЗУЛЬТАТОВ ИССЛЕДОВАНИЙ

СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННОЙ ЛИТЕРАТУРЫ

СОКРАЩЕНИЯ, ИСПОЛЬЗОВАННЫЕ В ТЕКСТЕ

БОЕ – бляшко-образующие единицы;

БСА – бычий сывороточный альбумин;

ВАК РФ – Высшая аттестационная комиссия Российской Федерации;

ВГНКИ – Всероссийский государственный научно-исследовательский институт контроля, стандартизации и сертификации ветеринарных препаратов;

ВНИВИП – Всероссийский научно-исследовательский ветеринарный институт птицеводства;

ВНИИ – Всероссийский научно-исследовательский институт;

ВНИИЗЖ – Всероссийский научно-исследовательский институт защиты животных;

ВОЗ – Всемирная организация здравоохранения;

ВЦОЗЖ – Всемирный центр охраны здоровья животных;

г. – город;

г. – год; гг. – годах;

ГАЕ – гемагглютинирующие единицы;

ГИСК – государственный институт стандартизации и контроля;

ГНУ – государственное научное учреждение;

гол. – голов;

ГУ – государственное учреждение;

ГУ КК – государственное учреждение Краснодарского края;

дн. – дней;

ДНК – дезоксирибонуклеиновая кислота;

др. – другие;

ЕС – Европейский Союз;

ЗАО – Западный административный округ;

ККРА – крове-капельная реакция агглютинации;

ККРНГА – крове-капельная реакция непрямой гемагглютинации;

КОЕ – колоний образующие единицы;

КФХ – крестьянско-фермерское хозяйство;

МГАВМиБ – Московская государственная академия ветеринарной медицины и биотехнологии;

мес. – месяцев;

мин. – минут;

мкр. кл. – микробных клеток;

млн. мкр. кл. – миллионов микробных клеток;

млрд. мкр. кл. – миллиардов микробных клеток;

МПА – мясо-пептонный агар;

МПБ – мясо-пептонный бульон;

МППБ – мясо-пептонный печеночный бульон;

МЭБ – Международное эпизоотическое бюро;

НИИ – научно-исследовательский институт;

НИИЭиМ – научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии;

НПП – научно-производственное предприятие;

НПФ – научно-производственная фирма;

ОАО – открытое акционерное общество;

об./мин. – оборотов в минуту;

ООО – общество с ограниченной ответственностью;

ПАБК – пропион-ацидофильная бульонная культура;

ПДРФ – (анализ) полиморфизма длины рестрикционных фрагментов;

ПЦР – полимеразная цепная реакция;

ПЭГ – полиэтиленгликоль;

РА – реакция агглютинации;

РАМН – Российская академия медицинских наук;

РН – реакция нейтрализации;

РНГА – реакция непрямой гемагглютинации;

РНК – рибонуклеиновая кислота;

РТГА – реакция торможения гемагглютиации;

РЭК – развивающиеся эмбрионы кур;

СББЖ – станция по борьбе с болезнями животных;

СПНПФ – совместное предприятие научно-производственная фирма;

СПФ – свободные от патогенной флоры;

стр. – строение;

США – Соединенные Штаты Америки;

т. е. – то есть;

т. к. – так как;

тыс. мкр. кл. – тысяч микробных клеток;

ул. – улица;

ФГБОУ ВПО – федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования;

ФГБУ – федеральное государственное бюджетное учреждение;

ФГОУ ВПО – федеральное государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования;

ФГУ – федеральное государственное учреждение;

ФГУН – федеральное государственное учреждение науки;

ФГУП – федеральное государственное унитарное предприятие;

ЦМД – Центр молекулярной диагностики;

ЦНИИЭ – Центральный научно-исследовательский институт эпидемиологии;

ЦНМВЛ – Центральная научно-методическая ветеринарная лаборатория;

ЦФО – Центральный Федеральный округ;

ЭЛД – эмбриональная летальная доза;

ЭЭЖ – эктраэмбриональная жидкость;

ЮВАО – Юго-Восточный административный округ.

ВВЕДЕНИЕ

Актуальность темы. Сальмонеллез – одна из ведущих проблем промышленного и частного птицеводства, инфекционная болезнь птиц и животных, опасная для человека пищевым токсикоинфицированием.

Сальмонеллез получил широкое распространение во всех отраслях промышленного и непромышленного птицеводства. Наибольшие ущербы от болезни и сальмонеллоносительства отмечают в голубеводстве, промышленном птицеводстве кур, уток, гусей. Участились вспышки в пунктах разведения и содержания фазанов, индеек, перепелов и других птиц.

По заключению экспертов Всемирной организации здравоохранения сальмонеллез, как зоонозная инфекция, не имеет себе равных по сложности эпизоотологии, эпидемиологии и трудностям борьбы с ним .

Развитие производства продуктов питания, получаемых от сельскохозяйственной и промысловой птицы, неизбежно связано с интенсификацией промышленного птицеводства, увеличением производственных мощностей и плотности птицепоголовья. Хозяйства (птицефабрики, утиные, гусиные, фазаньи, страусиные фермы, индейкофермы, голубефермы и другие), сталкиваясь с проблемой сальмонеллеза, несут большие потери из-за смертности молодняка, снижения продуктивности, качества продукции и наложения ограничительных мероприятий на выпуск продукции. Зоопарки, вольеры и голубятни теряют птицу, ее выставочные и летные качества, кроме того, становятся объектами угрозы инфицирования человека .

В этих условиях несоблюдение личной гигиены чревато заражением.

Обсемененные сальмонеллами яйца и мясо птиц являются основными причинами пищевых токсикоинфекций у людей. Согласно медицинской статистике токсикоинфекции сальмонеллезной этиологии распространены почти во всех странах мира, причем за последнее двадцатилетие медицина отмечает рост сальмонеллезных заболеваний среди людей, что обусловлено, в первую очередь, ростом инфицированности домашних животных и птиц .

Так, в Великобритании в 1989 году, было зарегистрировано 5 сальмонеллезных вспышек; обсемененные сальмонеллой яйца и тушки птицы обнаружили в магазинах, что привело к отставке министра сельского хозяйства E. Curie . Американские ученые T.K. Kolferstein и D.W. Bettcher отмечают, что за 1993 г. только в США число случаев токсикоинфицирования человека составило 224 тыс., из них 96 % – сальмонеллез, причиной которого были в 65 % случаев зараженное мясо птицы и яичные продукты . S. Lukinmaa, R. Schildt, T. Rinttila сообщали о 12 вспышках сальмонеллеза в Финляндии в 1997 году . В 1998 году было отмечено более вспышек сальмонеллеза в США .

В Российской Федерации статистический мониторинг выявил возрастание числа неблагополучных пунктов по сальмонеллезу людей с 60 в 1991 г.

до 170 в 2001 г. . Показатель заболеваемости составляет в среднем по стране 35,0, достигая 200 на 100000 детей раннего возраста .

В нашей стране, по данным Роспотребнадзора, заболеваемость пищевыми токсикоинфекциями сальмонеллезной этиологии у людей в 2006 г. стабилизировалась на уровне 31,96 на 100 тыс. населения, что на 9 % выше, чем в 2005 г. Сальмонеллез занимает второе место после дизентерии в структуре острых кишечных инфекций людей. В этиологической структуре сальмонеллеза, как и в предыдущие годы, преобладают сальмонеллы группы D (около 80 %) – Salmonella enteritidis и серогруппы В – Salmonella typhimurium (более 15 %). Ежегодно в нашей стране регистрируется до 30 крупных вспышек сальмонеллеза пищевого характера с числом пострадавших от 500 до человек .

В 2002 году доля S. enteritidis составила 65 % от всех изолятов сальмонелл, выделенных от человека по всему миру, на втором месте S.

typhimurium – 12 % . По данным С.В. Цыгановой, в 2000-2002 гг. S.

enteritidis и S. typhimurium вместе составили 90 % от всех сальмонелл, выделенных от человека .

По данным ветеринарной отчетности Россельхознадзора в России за последние пять лет выявлено снижение количества неблагополучных по сальмонеллезу пунктов. В то же время число заболевших сальмонеллезом птиц возросло с 2003 года более чем в 40 раз . Существует проблема недостаточного мониторинга и выявления неблагополучия в условиях частных подворий, голубятен, вольеров. В этой связи реальное число неблагополучных пунктов может быть гораздо выше, чем показывают данные официальной статистики.

В 2005-2010 гг. Европейской комиссией по безопасности продуктов (EFSA) были определены уровни распространенности сальмонелл в птицеводческих хозяйствах Европейского Союза, показавшие, что бактериологически положительными по основным патогенным серовариантам сальмонелл были 20,3 % крупных яичных хозяйств с вариациями между странами – членами ЕС до 62,5 % .

Борьба с сальмонеллезом птиц заключается в проведении организационных, санитарно-гигиенических мероприятий, серологическом выявлении подозреваемых в заражении или бактерионосительстве птиц, проведении терапевтических мероприятий (профилактические и лечебные обработки птиц антибиотиками и другими химиотерапевтическими препаратами) . К сожалению, инструкции по борьбе с сальмонеллезом птиц и пуллорозом-тифом, которые имеются для промышленного птицеводства , на сегодняшний день не рассматривают всех аспектов противоэпизоотической борьбы.

Для малых форм разведения птицы: голубятен, частных вольеров, ферм систематизация мероприятий, разработка средств эффективной биологической защиты и терапии больных птиц являются актуальной задачей.

Эффективность проводимых мероприятий против сальмонеллеза птиц недостаточна. Антибиотикообработки не позволяют избавить птицу от сальмоносительства, не способны профилактировать и ликвидировать инфекцию, а предотвращают лишь массовое клиническое проявление заболевания. Кроме того, применение антибактериальных и других химиотерапевтических препаратов влияет на качество продукции, остаточные количества антибиотиков, сульфаниламидов, нитрофуранов вносят ограничения на использование продукции. Постоянное их применение нарушает биоэкологию окружающей среды и провоцирует появление антибиотикоустойчивых форм вирулентных сальмонелл . Однако только применением вакцин не решалась проблема защиты цыплят первых дней жизни и освобождения птицепоголовья от бактерионосительства. По этой причине в последнее время возрастает интерес к фаговым препаратам, которые обладают лечебным эффектом и обеспечивают санирование организма от бактерионосительства. Так, для профилактики и ликвидации сальмонеллеза кур были предложены сальмофаг энтеритидис и бивалентный сальмофаг, позволяющие обеспечивать раннюю защиту молодняка и ликвидацию неблагополучия птичников по сальмонеллезу и пуллорозу .

Иначе обстоят дела в других отраслях птицеводства. Для уток, гусей, индеек, фазанов, голубей и других птиц основным этиологическим серовариантом является Salmonella typhimurium. Предложенная живая вакцина из аттенуированных штаммов S. typhimurium для водоплавающей птицы не обеспечивает санитарное благополучие в полном объеме по ряду причин, в т.ч. по причине провокаций положительных результатов при контрольных анализах на сальмонеллез . До настоящей работы в России не было сертифицированных инактивированных вакцин против сальмонеллеза голубей (где применение живой вакцины чревато снижением плодовитости), не предложено унифицированных средств иммунопрофилактики, составляющих комплекс антигенов по нескольким эпизоотическим штаммам и серовариантам для разводимых птиц разных видов.

Существующая потребность научных изысканий в этой сфере обозначила необходимость систематизации мероприятий по борьбе с сальмонеллезом в голубеводстве и других отраслях птицеводства, необходимость создания биологически активных средств и способов лечения сальмонеллеза птиц, новых экологически и санитарно безопасных методов борьбы с инфекцией сальмонеллеза. Актуальным является необходимость создания средств специфической профилактики сальмонеллеза птиц разных видов, исходя из эпизоотической ситуации и результатов внутривидового мониторинга на современном этапе. Кроме того, важной практической востребованностью является разработка и создание комплексных средств иммунизации, обеспечивающих удобство применения и высокие протективные свойства против основных инфекций в конкретных отраслях промышленного и непромышленного птицеводства.

Цель и задачи исследования. Целью настоящих исследований являлись разработка средств и методов лечения и профилактики сальмонеллеза птиц, совершенствование системы противоэпизоотических мероприятий, направленных на борьбу с сальмонеллезом птиц.

Для достижения поставленной цели были определены следующие задачи:

Выяснить этиологическую структуру сальмонеллеза птиц разных видов, изучить биологические свойства и антибиотикорезистентность возбудителя.

Определить вирулентные и иммуногенные изоляты возбудителя со свойствами производственных и контрольных штаммов, провести их депонирование.

Определить технологические параметры изготовления и эффективность применения инактивированной вакцины против сальмонеллеза голубей.

Выделить и провести селекцию, изучение морфологической структуры и биологических свойств бактериофагов со свойствами производственных штаммов.

Сконструировать препараты бактериофагов против сальмонеллеза птиц, оценить их терапевтическую эффективность.

Разработать метод для лечения сальмонеллеза птиц с использованием препаратов бактериофагов и пробиотика.

Сконструировать и определить оптимальную иммунизирующую дозу ассоциированной вакцины против сальмонеллеза и ньюкаслской болезни Разработать технологическую схему производства вакцины ассоциированной инактивированной против сальмонеллеза и болезни Ньюкасла Провести доклинические и клинические испытания предложенной вакцины с целью ее регистрации и сертификации на территории Российской Федерации.

Усовершенствовать систему противоэпизоотических мероприятий по 10.

борьбе с сальмонеллезом птиц разных видов путем введения в нее разработанных средств и методов лечения и профилактики болезни.

Научная новизна . Изучена современная эпизоотическая ситуация по сальмонеллезу у птиц разных видов и направлений содержания.

Впервые проведен анализ свойств большого числа изолятов возбудителей сальмонеллеза голубей и декоративных птиц. Производственные и производственно-контрольные штаммы сальмонелл, выделенные автором, депонированы в коллекции ФГУ ВГНКИ и впервые использованы для создания средств специфической профилактики.

Впервые разработана и апробирована вакцина инактивированная полиэтиленгликолевая против сальмонеллеза голубей.

Выделены бактериофаги с высокими литическими свойствами, адсорбционными свойствами, специфичностью действия, изучена их морфологическая структура, антигенное родство.

Производственные штаммы бактериофагов, выделенные под руководством и с участием автора, депонированы в коллекции ФГУ ВГНКИ и впервые использованы для создания лечебно-профилактических препаратов против сальмонеллеза птиц. Впервые разработан препарат Бактериофаг тифимуриум против сальмонеллеза голубей. Совершенствованы лечебные средства против сальмонеллеза птиц. Впервые разработан метод селективной деконтаминации для лечения сальмонеллеза птиц с использованием предложенных препаратов бактериофагов и пробиотика Лактобифадол.

Разработана и внедрена в производство и ветеринарную медицину вакцина «Виросальм» ассоциированная инактивированная против сальмонеллеза и болезни Ньюкасла голубей и декоративных птиц – новый эффективный биопрепарат, не имеющий аналогов в Российской Федерации. Изучены биологические свойства нового вируса болезни Ньюкасла, выделенного автором, обладающего свойствами производственного штамма.

Усовершенствована система лечебно-профилактических мероприятий при сальмонеллезе птиц с использованием новых средств и методов, разработанных автором или под руководством автора.

Научная новизна работы подтверждена патентами на изобретение:

№2377015 «Вакцина инактивированная против сальмонеллеза голубей и способ ее применения», №2366456 «Препарат против сальмонеллеза голубей и способ лечения сальмонеллеза голубей», №2375075 «Способ лечения птиц при сальмонеллезе, вызванном Salmonella typhimurium».

Практическая значимость . По результатам исследований разработаны «Рекомендации по диагностике, профилактике и ликвидации сальмонеллеза кур» и «Рекомендации по диагностике, профилактике и ликвидации сальмонеллеза голубей», одобренные Департаментом ветеринарии Министерства сельского хозяйства Российской Федерации.

Вакцина «Виросальм» ассоциированная инактивированная против сальмонеллеза и болезни Ньюкасла голубей и декоративных птиц сертифицирована, зарегистрирована на территории Российской Федерации и внедрена в практику ветеринарной медицины.

Разработанные в ходе работы Бактериофаг тифимуриум против сальмонеллеза голубей, Бивалентный бактериофаг против сальмонеллеза птиц, вакцина инактивированная полиэтиленгликолевая против сальмонеллеза голубей рекомендованы для применения в качестве средств лечения и профилактики сальмонеллеза. Их применение позволяет эффективно ликвидировать очаг инфекции, снимает сальмонеллоносительство у птиц, препятствует инфицированию и предотвращает заболеваемость и гибель птиц от сальмонеллеза.

Предложенные новые средства, а также способы их применения и метод селективной деконтаминации позволяют совершенствовать борьбу с сальмонеллезом птиц.

Также материалы работы включены в «Методические рекомендации по недопущению распространения гриппа птиц и болезни Ньюкасла голубей в частных подворьях, птицеводческих хозяйствах и голубятнях», утвержденные Учебно-методическим советом ФГБОУ ВПО МГАВМиБ (пр. №11 от 25.10.11).

Личный вклад соискателя. Автору принадлежат непосредственное осуществление исследований этиологического профиля сальмонеллеза птиц, выделение и изучение биологических свойств изолятов сальмонелл, определение и депонирование производственных штаммов, создание вакцины инактивированной полиэтиленгликолевой против сальмонеллеза голубей, создание и внедрение вакцины «Виросальм» ассоциированной инактивированной против сальмонеллеза и болезни Ньюкасла голубей и декоративных птиц, создание Бивалентного бактериофага против сальмонеллеза птиц.

Автору принадлежат организация и проведение работ по выделению бактериофагов, совместно с Чирковой И.В. – изучение их биологических свойств и депонирование производственных штаммов, разработка и испытания препарата Бактериофаг тифимуриум против сальмонеллеза голубей.

Апробация результатов диссертации. Основные результаты исследований доложены на XI Московском международном ветеринарном конгрессе 17-19 апреля 2003 г.; Межрегиональной научно-практической конференции молодых ученых «Вклад молодых ученых в решение проблем аграрной науки» 12-13 мая 2005 г. во ФГОУ ВПО «Воронежский государственный аграрный университет имени К.Д. Глинки», г. Воронеж; на XIII Московском международном конгрессе по болезням мелких домашних животных 23- апреля 2005 г.; на Международной школе-конференции молодых ученых «Проблемы рационального природопользования техногенного региона» 15декабря 2005 г. в ФГОУ ВПО «Кемеровский государственный сельскохозяйственный институт», г. Кемерово; на совместной конференции компании Hill’s и Российского онкологического научного центра имени Н.Н. Блохина 21 апреля 2006 г., г. Москва; на II Открытой Всероссийской научнопрактической конференции молодых ученых «Молодежь и наука XXI века»

24-26 апреля 2007 г. в ФГОУ ВПО «Ульяновская государственная сельскохозяйственная академия», г. Ульяновск; на V Международном симпозиуме «ЕС-Россия: сотрудничество в области биотехнологии, сельского, лесного, рыбного хозяйства и пищи в 7 Рамочной программе ЕС» 1-3 октября 2008 года в г. Пущино; на Международной научно-практической конференции молодых ученых и специалистов «Вопросы ветеринарии и биотехнологий», посвященной 90-летию МГАВМиБ, 11-13 ноября 2009 г. в ФГОУ ВПО МГАВМиБ, г. Москва; на VII Международном ветеринарном конгрессе по птицеводству 26-29 апреля 2010 года в г. Москва; на Международной научнопрактической конференции «Молодость, талант, знания – ветеринарной медицине и животноводству» 21-24 сентября 2010 г. в ФГОУ ВПО «Уральская государственная академия ветеринарной медицины», г. Троицк; на IV Международной научно-практической конференции молодых ученых «Инновационные тенденции развития Российской науки» 15-20 апреля 2011 г. в ФГОУ ВПО «Красноярский государственный аграрный университет», г.

Красноярск; на Международной научно-практической конференции молодых ученых «Молодежь и инновации – 2011» 25-27 мая 2011 г. в Белорусской государственной сельскохозяйственной академии, г. Горки Республики Беларусь; на Международной российско-чешской научно-практической конференции молодых ученых и специалистов «Актуальные вопросы ветеринарии и ветеринарной биологии» 25 апреля 2012 года в ФГБОУ ВПО МГАВМиБ г.

Москва и других.

Результаты исследований доложены также на международных, всероссийских и академических школах молодых ученых, научно-практических семинарах, методических совещаниях факультета ветеринарной медицины и факультета повышения квалификации, кафедральном и межкафедральных заседаниях ФГБОУ ВПО МГАВМиБ.

Публикации . По теме диссертации и материалам исследований опубликованы 48 научных работ, в т.ч. 20 статей в научных журналах, из которых 18 – в изданиях, рекомендованных ВАК РФ, в т.ч. 3 патента, а также монография, 3 рекомендации, 24 статьи в сборниках научных трудов.

Структура и объем диссертации . Материалы диссертации изложены на 307 листах машинописного текста и включают введение, обзор литературы, собственные исследования, обсуждения полученных результатов, выводы, сведения о практическом использовании результатов исследований, рекомендации по использованию научных выводов, список использованной литературы (301 источник, в т.ч. 153 – иностранных авторов). Диссертационная работа содержит 42 таблицы, 19 рисунков, 114 листов приложений.

На защиту выносятся следующие положения и результаты:

1. Этиологическая структура сальмонеллеза птиц разных видов в сравнительном аспекте.

2. Технология производства вакцины инактивированной полиэтиленгликолевой против сальмонеллеза голубей, ее свойства и эффективность применения.

3. Морфологическая характеристика, биологические, адсорбционные свойства и антигенное родство бактериофагов Phagum Salmonella typhimurium.

4. Технология производства и эффективность применения Бактериофага тифимуриум против сальмонеллеза голубей и бивалентного бактериофага против сальмонеллеза птиц.

5. Биологические свойства вируса ньюкаслской болезни «PN-T».

6. Технология производства и протективная эффективность вакцины «Виросальм» ассоциированной инактивированной против сальмонеллеза и болезни Ньюкасла голубей и декоративных птиц.

7. Усовершенствованная система противоэпизоотических мероприятий против сальмонеллеза птиц разных видов, включающая метод селективной деконтаминации и способы профилактики сальмонеллеза птиц с использованием разработанных препаратов бактериофагов и вакцин.

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

2.1. Этиологические особенности сальмонеллеза птиц Сальмонеллез – распространенное инфекционное заболевание всех видов птиц, а также животных и человека, которое вызывается бактериями рода Salmonella и характеризуется разнообразными клиническими проявлениями, высокой смертностью молодняка птиц и широким бактерионосительством.

Возбудитель болезни – бактерии из рода Salmonella семейства Еnterobacteriaceae.

Впервые бактерию выделили из органов свиней американские ветеринарные врачи Salmon и Smitt в 1885 году и назвали микроб Bacter suipestifer. Затем в 1888 г. Gartner при выяснении этиологии отравлений людей обнаружил один и тот же микроб этого рода в мясе коровы и селезенке умершего человека, бактерию назвали Bact. еnteritidis .

В 1890 г. Laffler выделил от павших мышей микроб, получивший название Bact. typhimurium. В том же году Schottmuller и, одновременно с ним, Kurth во время массовой вспышки заболеваний, клинически сходных с брюшным тифом, выделили Bact. рaratyphi и указали на идентичность палочки Гетнера (Bact. enteritidis) с другими возбудителями пищевых токсикоинфекций. Поэтому все подобные бактерии объединили в одну группу «паратифозных» .

Международная номенклатурная комиссия в 1934 году отнесла все паратифозные бактерии в род Salmonella. С появлением и открытием новых сальмонелл предлагались различные классификации их с учетом культуральных, ферментативных и серологических свойств. Уже тогда многими исследователями была установлена клинико-эпидемиологическая связь между возбудителями типичного паратифозного заболевания у человека (паратиф А и В) и возбудителями сальмонеллезных токсикоинфекций .

Согласно современной номенклатуре ВОЗ (1990 г.), которая отражает последние достижения в таксономии, род Salmonella состоит из двух видов:

Salmonella enterica и Salmonella bongori. Salmonella enterica, в свою очередь, подразделяется на 6 подвидов, которые различаются по определенным биохимическим характеристикам. Они обозначаются номерами или собственными именами:

I - подвид enterica (choleraesuis);

II – подвид salamae;

III - подвид arizonae IIIa и diarizonae IIId;

IV – подвид houtenae;

V – подвид bongori;

VI – подвид indica.

Штаммы Salmonella классифицируются на серовары на основе внешнего различия липополисахаридных антигенов (О) и флагеллярных белковых антигенов (Н) в соответствии со схемой Кауфмана-Уайта. На сегодня насчитывается более 2500 сероваров сальмонелл, которые разделены по антигенному родству на 52 серологические группы. В пределах каждого серовара сальмонеллы подразделяются на биовары, фаговары, кроме того, они различаются по характеру продуцируемого бактериоцина . Их количество постоянно увеличивается .

Основные возбудители сальмонеллёзов входят в состав I и II подвидов. Деление на подвиды имеет определённое эпидемиологическое значение, так как естественным резервуаром сальмонелл I подвида служат теплокровные животные, а для представителей остальных подвидов сальмонелл служат и холоднокровные животные, и окружающая среда .

Возбудители сальмонеллеза птиц относятся преимущественно к подвиду enterica. Это – прямые с закругленными концами грамотрицательные палочки длиной 2-5 мкм и шириной 0,7-1,5 мкм, не кислотоустойчивые и не формирующие эндоспор и микроцист. За счет перитрихиальных жгутиков они обычно подвижны, за исключением Salmonella gallinarum и S. pullorum.

Сальмонеллы обладают как дыхательным, так и ферментативным типами метаболизма, что отличает их от других бактерий семейства Enterobacteriacea.

Сальмонеллы являются аэробами и факультативными анаэробами.

Большинство сальмонелл хорошо растет на обычных питательных средах, образуя колонии на твердых средах диаметром 2-3 мм. Однако некоторые сероварианты (Salmonella abortusequi, S. typhisuis, S.abortusovis) обычно образуют более мелкие колонии диаметром около 1 мм .

Оптимальная температура роста для бактерий рода Salmonella – 37С, pH среды 7,0-7,2, однако изоляты сальмонелл могут расти при pH ниже 7,0 и выше 8,0 . Культуры энтеробактерий рода Salmonella хорошо растут на обычных питательных средах: МПА, МПБ, агарах Эндо, Левина, Плоскирева, висмут-сульфитном агаре и других.

На МПБ через 3-4 часа роста при температуре 35-37°С сальмонеллы образуют равномерное помутнение, а через 18-24 часа – небольшой осадок на дне пробирки, легко разбивающийся при встряхивании в равномерную взвесь. Некоторые свежевыделенные из органов павших животных штаммы сальмонелл при росте в бульоне образуют легко разбивающуюся пленку .

В современной системе идентификации представителей рода сальмонелл среди других представителей семейства Enterobacteriaceae используют ряд биохимических тестов, основанных на метаболических особенностях бактерий (см. таблицу 1) . Важное дифференциальное значение для рода Salmonella имеют отрицательные тесты на индолообразование, утилизацию цитрата и малоната натрия, дезаминирование фенилаланина, положительный тест на декарбоксилирование лизина .

В процессе роста энтеробактерии рода Salmonella не ферментируют лактозу, сахарозу, инозит, салицин, адонит, не гидролизируют мочевину и желатин, образуют сероводород, редуцируют нитраты, ферментируют маннит (таблица 1).

Таблица 1. Ферментативные свойства бактерий рода Salmonella Условные обозначения:

«+» - положительная реакция у 90 % штаммов и более;

«-» - отрицательная реакция у 90 % штаммов и более;

«(+)» - замедленная (позже 24 часов) положительная реакция у 90 % штаммов и более;

«+», «-» - чаще положительная реакция, реже отрицательная – 90 % штаммов или более;

«-», «+» - чаще отрицательная реакция, реже положительная реакция у 90 % штаммов;

«+», «(+)» - чаще положительная, реже замедленно положительная реакция у 90 % штаммов;

«-», «(+)» - чаще отрицательная, реже замедленная положительная реакция у 90 % штаммов и более;

«Х» - различные результаты реакций: «+», «(+)», « - ».

Однако ферментативная активность у сальмонелл может варьировать, что послужило поводом подразделить их на подроды. Такая вариабельность в ферментации отдельных углеводов позволяет выявить в пределах отдельных сероваров стабильные биохимические варианты или биовары . Отмечено также, что культуры в R- и S-форме могут иметь различия в биохимических и серологических свойствах .

Дифференциация по биохимическим признакам целесообразна, прежде всего, в отношении наиболее широко распространенных на той или иной территории серовариантов сальмонелл. К примеру, для разделения сероварианта S. typhimurium на биовары необходим набор тестов, по которым их удается дифференцировать. Так, известна схема, позволяющая быстро подразделить S. typhimurium на 4 стабильных биовара в зависимости от отношения изучаемых штаммов к рамнозе и инозиту, а также более расширенная схема определения биоваров S. typhimurium по отношению к арабинозе, ксилозе, рамнозе, D- и i-тартратам, мукату и инозиту .

Также существует подразделение сальмонелл на фаговары, основанное на специфичности бактериофагов по отношению к микробу-хозяину . В основу этой классификации положена внутриродовая специфичность бактериофагов.

Антигенная структура сальмонелл, на основании которой в 1940 году предложена их классификация (по Кауфману и Уайту), представлена соматическим, жгутиковым антигенами, а также Vi- и поверхностными Кантигенами.

О-антиген (соматический, термостабильный) – термостабильный липосахаридно-белковый комплекс. Белковый компонент комплекса обусловливает его антигенность и колициногенность, липидные компоненты – токсичность, а полисахарид – серологическую специфичность. Высоко полиморфный поверхностный полисахарид является частью липополисахарида, локализованного на внешней мембране. Специфичность О-антигена обусловлена концевыми сахарами: в серогруппе А – паратозой, серогруппе В – абеквозой, серогруппе Д – тивелозой, а серогруппа Е1 отличается отсутствием концевого остатка сахара .

Термолабильный жгутиковый Н-антиген был открыт Шифом в 1922 г.

В 1929 г. Кауфман показал, что этот антиген может являться монофазным или двухфазным. В одной и той же популяции определяются либо обе фазы Н-антигена, либо одна из фаз. Отдельная клетка не может синтезировать обе фазы Н-антигена одновременно. Синтез обеих фаз контролируется двумя различными генами Н1 и Н2, расположенными на бактериальной хромосоме раздельно . Одна фаза обладает специфическими свойствами, другая – неспецифическими свойствами, характерными для различных серовариантов сальмонелл . Жгутики энтеробактерий являются внеклеточными белковыми термолабильными образованиями, которые могут быть легко отделены от клетки без нарушения ее жизнедеятельности. Жгутики разрушаются при температуре 60С, а также при действии звуковых и ультразвуковых волн. Но Н-антиген устойчив к формалину, который повышает упругость жгутиков .

Различия строения Н-антигена внутри каждой группы сальмонелл позволяют дифференцировать их на серологические варианты (серовары) .

К-антигены представляют собой белково-полисахаридный комплекс, который содержит до 60-65 % белка и 25-30 % углеводов. К-антиген устойчив к воздействию кислоты и этанола, обладает выраженными антигенными свойствами, стимулирует синтез специфических К-антител. К-антиген определяет способность бактерий к внутриклеточному размножению .

Известны и другие антигены сальмонелл.

Так, М-антиген обнаружен Кауфманом в 1936 году у слизистых штаммов S. choleraesuis, S. dublin и некоторых других. М-антиген является кислым полисахаридом, нерастворимым в воде и разрушающимся под действием кислоты и этанола. М-антиген обладает слабыми антигенными свойствами.

Т-антиген описан Кауфманом в 1956 году у S. typhimurium и S.

paratyphi B. Это – транзиторные антигенные формы, образуются на агаре в гладком виде, однако лишены О-специфичности .

Мозаичное строение антигенов сальмонелл определяется наличием вариаций, которые приводят к некоторым закономерным изменениям антигенов. В практической работе знание таких вариаций необходимо для получения однородных результатов и их правильной интерпретации.

У сальмонелл различают несколько видов антигенных вариаций:

Н-О- вариации – это переход из жгутиковой Н-формы в безжгутиковую Оформу;

S-R- вариации – это переход от гладкой S-формы в шероховатую R-форму.

Существуют также формы, промежуточные между гладкими, блестящими «S» и тусклыми, шероховатыми «R» колониями. Однако, в некоторых случаях, колонии, относящиеся по серологическим свойствам к шероховатым, могут иметь вид гладких и, наоборот, морфологически шероховатые формы содержат антигены, присущие гладким колониям .

Для полной идентификации сальмонелл необходима их серологическая типизация по О- и Н-антигенам в реакции агглютинации с поливалентными групповыми О-сыворотками и с монорецепторными О- и Нантигеннывми сальмонеллезными сыворотками. При серологической идентификации сальмонелл возможны трудности в выявлении Н-антигена, или одной из его фаз, что может быть связано с угнетением или утратой Нантигена, либо с преобладанием в популяции особей с преимущественным содержанием какой-либо одной фазы .

В серогруппе А (02) представлена S. рaratyphi A, в серогруппе В (04) – Ss. рaratyphi B, typhimurium, abortus equi, abortus ovis, heidelberg, stanley и др.; в серогруппе С представлены Ss. сholeraesuis, paratypti C, typhisuis, thompson; в серогруппе D – Ss. typhi, enteritidis, dublin, gallinarum, pullorum, moskow, panama и др.; в серогруппе E – Ss. anatum, give и другие . Сохранность сальмонелл в помете и фекалиях составляет месяцы и годы .

Сальмонеллы хорошо и длительно переносят низкие температуры (например, при температуре от 0 до -2°С они выживают в течение 5-6 месяцев), а при высоких температурах – сравнительно быстро погибают (при кипячении погибают практически мгновенно, при воздействии температурой 60-80°С могут сохраняться в течение 2-40 минут) .

Для уничтожения сальмонелл внутри кусков мяса необходимо варить его в течение 2 часов и более .

Важное практическое значение имеет такое биологическое свойство сальмонелл как чувствительность к терапевтическим концентрациям антибактериальных препаратов.

Многочисленными исследованиями отмечено, что большинство свежевыделенных, особенно госпитальных штаммов сальмонелл полирезистентны к 8-10 химиотерапевтическим препаратам различных групп: эритромицину, доксициклину, метациклину, фуразолидону, ампициллину, карбенициллину, левомицетину, тетрациклину, интестопану, энтеросептолу, бисептолу и другим. Остается сравнительно достаточной чувствительность сальмонелл к терапевтическим концентрациям цефаллоспоринов III поколения (клафоран, лонгацеф, цефобид и др.), аминогликозидов II-III поколения (гентамицин, сизомицин, тобрамицин, амикацин, нетилмицин), фторхинолонов (офлоксацин, норфлоксацин, ципрофлоксацин, пефлоксацин), а также к терапевтической концентрации рифампицина, полимиксина, тиенама, интетрикса, нифуроксазида .

Проблема резистентности сальмонелл обострилась в 1972 году, когда во многих регионах мира были зарегистрированы вспышки, вызванные штаммами S. typhi, устойчивыми к хлорамфениколу, сульфаниламидам, тетрациклинам и стрептомицину, тогда как ампициллин и ко-тримоксазол сохраняли активность. Через 20 лет повсеместно выделяли штаммы устойчивые и к этим антимикробным препаратам .

Отмечаются данные исследователей о множественной антибиотикорезистентности сальмонелл. Так, в Санкт-Петербурге в 1996 г. выделили клинические штаммы S. typhimurium и изоляты из окружающей среды, устойчивые к цефотаксиму. В Екатеринбурге в 1999 г. 16,7 % выделенных сальмонелл характеризовались устойчивостью к ампициллину и сульбактаму, 13,8 % – к тетрациклину, 6,1 % изолятов – к ко-тримоксазолу. Кроме того, выделили клинический штамм Salmonella typhimurium, устойчивый к цефаллоспоринам III поколения, но чувствительный к фторхинолонам и котримоксазолу .

В Европе резистентность к традиционным антибиотикам колеблется от 20 % до 30 % в зависимости от серотипа сальмонелл, полирезистентность клинических штаммов S. typhimurium составила 51 % . В ЮгоВосточной Азии резистентность изолятов S. choleraesuis к традиционным антибиотикам превысила 90 %, к ципрофлоксацину – 59 % с сохранением умеренной чувствительности к цефаллоспоринам III поколения .

В 1998-1999 гг. в Польше при исследовании чувствительности фекальных культур сальмонелл к 14 антибиотикам (преимущественно Ss.

typhimurium, virchow, enteritidis, hadar и infantis) отметили резистентность к и более антибиотикам более 50 % изолятов. Впервые был выделен штамм, продуцирующий -лактамазы расширенного спектра класса СТХ-М, устойчивый к оксиимино--лактамам, но чувствительный к ингибиторам лактамаз .

Гены резистентности сальмонелл группируются, как правило, в структуре тяжелых плазмид и включают bla – бета-лактамазы семейства ТЕМ-1 (ампициллин), catI (хлорамфеникол), dhfr1b/ dhfr VII (триметоприм), sulI (сульфаниламиды), str AB (стрептомицин) гены .

Устойчивость к традиционным антимикробным препаратам (тетрациклин, ампициллин, хлорамфеникол, аминогликозиды, сульфаниламиды) опосредуется не только циркуляцией плазмид резистентности. Важное значение здесь имеет хромосомный тип резистентности (фенотип ACSSuT), подробно описанный у S. typhimurium DT104 и других фаготипов, иногда в сочетании с резистентностью к триметоприму и ципрофлоксацину . Полирезистентная S. typhimurium DT104 (ACSSuT) была впервые выделена в Великобритании в 1981 г. от экзотических пернатых. Десятилетие спустя штамм распространился повсеместно среди человека, кур, крупного рогатого скота, свиней и овец . В США частота выделения подобных изолятов превышает 35 % .

Обнаруженные у сальмонеллы гены СТХ-M, CMY-2 и его дериваты, а также AmpC комплекс, кодирующие бета-лактамазы расширенного спектра, способны к межвидовому распространению и горизонтальной передаче от других видов энтеробактерий посредством конъюгативных плазмид, транспозонов и интегронов . В последние годы выделены изоляты с плазмидоопосредованной резистентностью к триметоприму и с хромосомной резистентностью низкого уровня к фторхинолонам. В 2000 году в Англии 1% изолятов сальмонелл обладал устойчивостью ко всем антибиотикам (фенотип ACSSuTTmCip) .

Немаловажную роль в механизмах резистентности сальмонелл играет система эффлюкса, установленная у S. typhimurium. Это трехкомпонентный комплекс ArcB/MexB, распознающий субстраты с концевыми липофильными цепями. Такая система позволяет бактериям выживать в неблагоприятных условиях внешней среды, включая присутствие -лактамных и других антибиотиков, тяжелых металлов, липополисахаридов .

Многообразие механизмов резистентности сальмонелл к антибиотикам, возможность горизонтальной передачи детерминант резистентности от других видов микроорганизмов, нерациональное применение антибиотиков в клинической и сельскохозяйственной практике способствуют быстрому распространению сальмонелл, резистентных к различным препаратам. Антибиотикорезистентная сальмонеллезная инфекция возникает либо в результате инфицирования исходно устойчивыми к антибиотикам штаммами, либо в результате приобретения ими резистентности в ходе антибактериальной терапии . Приобретение резистентности сальмонеллами обусловлено передачей им мобильных генетических элементов резистентности (плазмид, транспозонов, интегронов) от бактерий нормофлоры желудочно-кишечного тракта.

С другой стороны это может быть селекция устойчивых штаммов вследствие формирования субтерапевтических концентраций антибиотиков в очаге инфекции .

2.1.4. Факторы патогенности сальмонелл Патогенность сальмонелл обусловлена их способностью вырабатывать токсины, прикрепляться к поверхности эпителиальных клеток и размножаться внутри макрофагов печени и селезенки.

Известны три типа токсинов, вырабатываемых сальмонеллами: липидный эндотоксин и два вида белковых токсинов. Эндотоксин представлен липидом А, фрагментом липополисахарида клеточной стенки сальмонелл, который предохраняет микробную клетку от действия фагоцитов. Потеря бактерией способности синтезировать липополисахариды, например, у сероварианта S. typhimurium, ограничивает способность колонизировать кишечник и селезенку цыплят .

Белковые токсины – термолабильные энтеротоксины (стимулируют секрецию эпителиальных клеток, что приводит к накоплению жидкости в кишечнике и развитию диареи ) и термостабильные цитотоксины (вызывают структурные повреждения эпителиальных клеток кишечника ).

Термолабильные эндотоксины были обнаружены у 44 % из 123 штаммов S.

typhimurium, выделенных от различных животных, по данным McDonough, Timoney и др. .

По мнению некоторых зарубежных исследователей, способность сальмонелл прикрепляться к поверхности эпителиальных клеток обусловлена наличием фимбрий типа 1, а также продукцией маннозо-резистентного гемагглютинина . В инвазии сальмонелл в эпителиальную клетку участвуют фимбрии типа 1 и различные бактериальные протеины, синтез которых индуцируется при контакте бактериальной и эпителиальной клеток . Отмечено, что штаммы S. enteritidis и S. typhimurium, лишенные плазмид вирулентности, гораздо реже приводят к летальности у мышей . Наличие серотипспецифичных плазмид вирулентности не является обязательным условием для проявления патогенности сальмонелл .

К возбудителю сальмонеллеза восприимчивы птицы, животные и человек. Источником возбудителя инфекции являются больные животные, птицы, бактерионосители. Кроме того, источником возбудителя сальмонеллеза кур являются снесенные ими яйца (латентная инфекция) , хотя некоторые ученые считают, что возбудитель сальмонеллеза птиц вертикальным путем не передается, а заражение инкубационных яиц возможно горизонтально при нарушениях режима инкубации, насечках, бое, микротрещинах . Больная птица и бактерионосители выделяют наибольшее количество возбудителя с пометом. О выделении возбудителя с зобным содержимым и яйцами сообщают Б.Ф. Бессарабов, В.А. Бакулин, Н.И. Женихова и другие исследователи .

Факторами передачи возбудителя сальмонеллеза являются корма, вода, подстилка, кормушки, воздух, предметы ухода, почва, одежда и обувь обслуживающего персонала, а также инкубационные отходы. Первичный занос возбудителя на фермы чаще всего связан с завозом суточного молодняка, поступающего для выращивания из неблагополучных хозяйств, а также при заносе возбудителя с яйцом, боенскими отходами, кормами. Повторные вспышки сальмонеллеза птиц в неблагополучных по этой инфекции пунктах возникают при совместном содержании молодняка с более взрослой птицей – сальмонеллоносителями, пополнении стад из неблагополучных ферм, переводе птиц в инфицированные помещения или на выгулы без надлежащей дезинфекции .

Заражение птиц происходит алиментарным, аэрогенным и трансовариальным путями. Наиболее инвазионные сероварианты – S. typhimurium и S.

enteritidis, могут проникать в яичник еще в процессе формирования скорлупы. Заражение цыплят сальмонеллами через респираторный тракт часто происходит на фоне вирусных инфекций: инфекционного ларинготрахеита, инфекционного бронхита и других, в том числе при иммунизации живыми вакцинными штаммами .

Факторами, сопутствующими развитию инфекции сальмонеллеза, являются неполноценное и несбалансированное кормление, антисанитарные условия содержания, нарушение технологических схем кормления, скученное содержание, несоблюдение оптимальных параметров микроклимата.

В случае проникновения возбудителя на ферму в первую очередь заболевают слаборазвитые птенцы. Наблюдения показывают, что при появлении в хозяйстве сальмонеллеза, инфекция распространяется тем быстрее и дает тем больший отход, чем в менее благоприятных условиях кормления и содержания находится птица . Так, изучено, что при экспериментальном пероральном заражении молодняка птиц вирулентными культурами S.

enteritidis не всегда удается вызвать заболевание с типичными клиническими признаками и патологоанатомическими изменениями, если нет факторов, снижающих резистентность птицы .

Некоторые исследователи считают, что вертикальная передача S.

enteritidis трансовариальным путем является наиболее важной, т.к. этот серовар обладает фимбриями, благодаря которым может колонизировать слизистую оболочку репродуктивных органов .

Центром сотрудничества для реферации и исследований по сальмонеллам ВОЗ в 1990 году предложена классификация сальмонеллезов птиц по этиологии, согласно которой различают:

1) – сальмонеллез, вызванный S. gallinarum-pullorum (ранее именовавшийся как отдельная нозологическая единица – пуллороз-тиф) и S. enteritidis, относящимся к серогруппе D;

2) – сальмонеллез, вызванный S. typhimurium, поражающий, в основном, водоплавающую птицу;

3) – сальмонеллез птицы, вызываемый не адаптированными к организму птиц серовариантами сальмонелл (Ss. haifa, anatum, london и др.) .

Американские исследователи разделяют сальмонеллез птиц на 3 категории. К первой категории относят болезни птиц, вызванные неподвижными сальмонеллами – пуллороз цыплят, вызываемый S. pullorum и тиф взрослых птиц, вызываемый S. gallinarum. Общность антигенной структуры условно объединяет эта два сероварианта возбудителя в один – S. gallinarum-pullorum.

Вторая категория включает в себя все болезни, возбудителем которых являются подвижные серовары сальмонелл (в т.ч. S. enteritidis, S. typhimurium), называя их паратифоидными инфекциями. К третьей категории они относят инфекции, вызванные подвижными представителями подвида Arizonae, специфичные для индеек .

gallinarum-pullorum. Гибель молодняка кур по разным данным составляет от 5 % до 80 %. Инфекция S. typhimurium приводит к массовой заболеваемости и гибели молодняка уток (до 80 %) . Основным серовариантом, вызывающим сальмонеллез гусей, голубей, фазанов, является S.

typhimurium (вызывает сальмонеллез более чем в 95 % случаев), менее значимым – S. enteritidis (1-3 %). В редких случаях от этих птиц выделяли сероварианты Ss. hadat, heldelberg, gartneri, harar, abony и другие сальмонеллы редких групп . Эти же варианты сальмонелл характерны при микробоносительстве у голубей, уток, попугаев . S. enteritidis и S.

typhimurium – основные возбудители пищевых токсикоинфекций у людей .

Данные, полученные на основании анализа отчетов ветеринарных лабораторий Российской Феднрации в 2008 году, свидетельствуют о наибольшей эпизоотической значимости для птицеводства S. enteritidis – 59 % положительных результатов, S. gallinarum и S. pullorum – 22 % и S. typhimurium – 8 % .

Микробиологическим мониторингом в течение ряда лет более чем в 30 птицехозяйствах различного технологического направления установлено, что процент выделения S. enteritidis в хозяйствах по производству яйца (25,7более чем в два раза превышает процент выделения S. enteritidis в бройлерных хозяйствах (14,8-26 %). В индейководческих, гусеводческих и перепелином хозяйствах S. enteritidis не была выявлена .

Добрина М.Н. отмечает роль голубей в распространении энтеритидис инфекции на птицефабриках. Частота выделения культуры сальмонеллы данного сероварианта из помета голубей составила 11,9 % .

У взрослых кур сальмонеллез протекает, в основном, скрыто. Переболевшие птицы на протяжении многих месяцев, а, иногда, и пожизненно остаются бактерионосителями .

Патогенность энтеробактерий обусловлена их повышенной концентрацией в содержимом кишечника, адгезивной активностью, биосинтезом токсинов .

Сальмонеллы в организме птицы воздействуют на энтероциты экзотоксинами, ферментами и другими факторами патогенности, проникают из кишечника в кровяное русло, вызывая септицемию, токсемию, а при хроническом течении – дегенеративные процессы в паренхиматозных органах, особенно в печени и сердце.

Вследствие нарушения деятельности внутренних органов и под воздействием токсинов резистентность организма резко снижается, что приводит к генерализации инфекции и летальному исходу .

В случае аэрогенной передачи возбудителя воротами инфекции служит слизистая дыхательных путей, где на месте внедрения агента развивается очаговое или диффузное воспаление, откуда сальмонеллы проникают в кровеносные сосуды. Генерализация болезни может произойти и без формирования первичного очага .

Патогенные свойства сальмонелл обуславливаются образованием двух видов токсичных продуктов жизнедеятельности – экзотоксина и эндотоксина.

К экзотоксину отнесены продукты жизнедеятельности, активно секретируемые в окружающую среду. Эндотоксин образуется в результате лизиса клеток после их гибели. Принято считать, что эндотоксин обуславливает развитие болезни .

Основной компонент эндотоксина – полисахарид. Молекула его состоит из двух частей – самого полисахарида и липида А, определяющего токсичность всей молекулы. Обычно эндотоксины сальмонелл, особенно S. enteritidis, вызывают геморрагическое воспаление кишечника . Эндотоксин приводит к нарушению микроциркуляции крови вплоть до развития инфекционнотоксического шока. Одновременно развивается ДВС-синдром (синдром дессиминированного внутрисосудистого свертывания крови), который является следствием воздействия эндотоксина на свертывающую систему крови птицы. От воздействия эндотоксина страдает сосудисто-нервный аппарат, что проявляется в понижении тонуса сосудов, нарушении терморегуляции и гемостаза .

Повышенную восприимчивость молодняка птиц до 1,5-месячного возраста объясняют возрастными особенностями обмена веществ и нарушением барьерных функций органов под влиянием различных неблагоприятных условий среды. Gast и Beard наблюдали, что после перорального введения одинаковой дозы S. typhimurium двухдневным, трехдневным и семидневным цыплятам самый высокий процент адгезии возбудителя к клеткам прямой кишки наблюдался у первых .

Развитие клинической картины сальмонеллеза вариабельно. Инкубационный период болезни варьирует от 1 до 12-14 суток и зависит от дозы попавшего возбудителя, сероварианта и его патогенности .

При инфицировании восприимчивой птицы сальмонелл обнаруживали в кишечнике, нерассосавшемся желтке, печени, желчном пузыре, сердце, красном костном мозге, селезёнке, фабрициевой сумке, репродуктивных органах, головном мозге, а также в яйцах, снесённых больными курами . По данным В.А. Радченко у больных цыплят, зараженных S. enteritidis, наиболее обсеменены печень, селезенка, кровь в сердце, костный мозг и нерассосавшийся желток . Наибольший процент выделения S. enteritidis, по данным А.Н. Борисенковой и соавт., приходился на сердце (34,8 %), печень (30,4 %), легкие (26 %) цыплят и кур. Выделенные сальмонеллы из яичных фолликул (2,2 %) указывают на возможный трансовариальный путь передачи инфекции . При изучении возможности овариального заражения, оказалось, что инфицированными могут быть до 6 % яиц, полученных от клинически здоровой птицы . Humbert и соавт. установили, что у 94,3 % цыплят-бройлеров, инфицированных S. enteritidis в возрасте четырех недель, возбудитель находился преимущественно в слепых отростках толстого кишечника, у 56,6 % птицы – в печени, у 18,9 % – в яичниках и у 1,9 % птицы – в селезенке .

Некоторые исследователи отмечают, что S. enteritidis не является для птицы высоковирулентной, и эпизоотия развивается вяло, носит торпидный характер. Важнейшим местом накопления возбудителя является инкубатор, однако не все зараженные эмбрионы и вылупившиеся цыплята заболевают и гибнут. Цыплята, пережившие 12-дневный возраст, проявляют уже значительную устойчивость и, как правило, не болеют с выраженной клинической картиной .

Переболевшая птица остаётся пожизненно бактерионосителем. У взрослых птиц сальмонеллы, особенно S. typhimurium, локализуясь в фолликулах, зачастую вызывают инволюцию последних. Тем не менее, не исключен вариант попадания в воронку яйцевода фолликула, содержащего количество сальмонелл, ещё недостаточное для дегенеративных процессов. Таким образом, развивается инфицированное бактерией яйцо, в результате чего может происходить гибель эмбриона в яйце .

2.2. Клинико-патоморфологические характеристики Типичные признаки сальмонеллеза у птенцов – прогрессирующая сонливость, опущенные крылья, взъерошенное опрение, анорексия и истощение, призанки дегидратации, дрожь, профузный водянистый понос (у голубей, как правило, зеленого цвета), и прилипание фекалий вокруг анального отверстия .

Сальмонеллезная инфекция у птиц протекает остро, подостро или хронически, вызывая системные поражения в организме. Форма проявления и течение болезни зависят от пути попадания, дозы и вирулентности возбудителя, а также от резистентности организма. Клиническая картина у птиц разных видов, вызванная инфекцией Salmonella typhimurium, как правило, сходная. Диарея – не обязательный симптом. При остром течении болезнь характеризуется лихорадкой, дрожью, иногда серозно-слизистым и слизистогнойными конъюнктивитом и ринитом, развитием синдрома пневмонии. Цыплята широко расправляют крылья, перед гибелью ложатся на грудь, отмечается интенсивная одышка, взъерошенность или курчавость пушка. Птенцы голубей скапливаются около источников тепла. Пик смертности приходится в среднем на вторые-четвертые сутки с момента появления первых признаков болезни .

При подостром течении болезни отмечают отставание в росте и исхудание птицы, неравномерное развитие молодняка, расстройство деятельности кишечника, хрипы и затруднённое дыхание, воспаление лёгких . У голубей хроническое течение сальмонеллеза проявляется в суставной форме. В таких случаях у пораженной птицы наблюдают опухание суставов на ногах и крыльях, проявляется расстройство движений, малоподвижность, подвисание крыла, потеря способности к полету .

При подостром и хроническом течении сальмонеллеза у больных голубей, кур-молодок, кур-несушек и уток на пике яйценоскости отмечают снижение массы, желтушность слизистых оболочек, признаки желточного перитонита, иногда развиваются перигепатиты, оварииты, перитониты .

Сальмонеллёз у кур и водоплавающих птиц протекает чаще в виде моноинфекции, реже – в виде смешанной инфекции при эшерихиозе, пастереллёзе, орнитозе, аспергиллёзе, эймериозе и других болезнях, что необходимо учитывать при диагностике . У голубей эпизоотические вспышки сальмонеллеза чаще регистрируют на фоне инфекции ньюкаслской болезни. Причем первичной может быть как одна, так и другая инфекция. В случае осложненной (смешанной) инфекции течение, как правило, – острое или сверхострое. Голубята гибнут без развития клинической картины в состоянии угнетения или с признаками «вертячки» – опистотонуса, выкручивания шеи и головы, утраты способности к полету, передвижению, самостоятельному приему корма .

2.2.2. Патологоанатомические изменения У кур, уток, гусей при сальмонеллезе отмечают гибель эмбрионов на любом этапе эмбрионального развития, но чаще с 7 по 20 дни инкубации. При этом фиксируют основные патологические изменения – отёк аллантоисной оболочки, скопление уратов, массовые геморрагии и очаги некроза во внутренних органах и на желточном мешке .

Печень эмбрионов при поражении сальмонеллезом – увеличена в объме, неравномерно окрашена. Желток – густой, не рассосавшийся, зеленоватого цвета. В миокарде отмечают мелкие некробиотические очаги сероватого цвета .

У цыплят и птенцов, павших от сальмонеллеза, устанавливают характерные изменения кишечника. В просвете тонкой кишки – скопления слизи и газов. Слизистая оболочка – набухшая, гиперемированная, в отдельных участках отмечают мелкие кровоизлияния. В толстом отделе кишечника слизистая покрыта отрубевидным налётом, местами в ней находят петехии и эрозии . Часто можно отметить скопление казеозных масс в слепой кишке .

Селезенка – увеличена, набухшая, на разрезе можно установить повышенное кровенаполнение пульпы. Печень птицы, павшей от сальмонеллеза – коричневато-бурого цвета, с зеленоватым оттенком. Под капсулой и в толще паренхимы печени нередко обнаруживают мелкие очаги некроза светло-серого и белого цвета с желтым оттенком . Аналогичные некротические узелки отмечают в сердечной мышце и легких .

Также при вскрытии у пораженных птиц выявляют фибринозногнойный перигепатит и перикардит. В желточном мешке может присутствовать непоглощенный, подвергшийся коагуляции желток .

Слизистая желчного пузыря – обычно набухшая, гиперемированная.

При сальмонеллёзе, вызванном S. enteritidis, желчный пузырь заполнен желчью темно-оливкого цвета с примесью фибрина и слизи .

При подостром и хроническом течении болезни поражается преимущественно толстый отдел кишечника птицы, особенно отростки слепой кишки, где находят некроз слизистой с наложениями на её поверхности фибрина.

В паренхиматозных органах отмечают изменения аналогичные изменениям при остром течении сальмонеллеза у птиц, но выраженные сильнее .

Когда болезнь принимает продолжительное течение, тяжелый энтерит часто сопровождается местными некротическими очагами в слизистой оболочке тонкой кишки .

В грудной полости при сальмонеллезе у цыплят обнаруживают серозный выпот с примесью хлопьев фибрина. В легких – очаги уплотнения серокрасного цвета. Сердце несколько увеличено в объёме за счет расширения правого желудочка. Большинство авторов указывает на дряблость миокарда, кровенаполненность коронарных сосудов .

Другие иногда наблюдаемые повреждения организма восприимчивой птицы при сальмонеллезе включают гипопион, панофтальмит, гнойный артрит, аэросаккулит, омфалит .

У взрослых кур отмечают развитие деструктивных изменений яичных фолликулов, вызванные S. gallinarum-pullorum, и печени, вызванные S.

enteritidis, при обострении сальмонеллоносительства, а также отмечают появление некрозо-язвенных участков и кровоизлияний на слизистой кишечника . По данным Б.Ф. Бессарабова, у взрослой птицысальмонеллоносителей развивается атрофия скелетной мускулатуры .

У голубей, по данным Н.И. Жениховой, А.С. Кормщикова, Е.С. Кондратьева, при хроническом течении сальмонеллеза возбудитель локализуется в кишечнике, печени, селезенке, почках, легких, сердце, семенниках, суставах, яичниках, вследствие чего в этих органах развиваются воспалительные и дистрофически-некротические процессы .

При гистологических исследованиях у цыплят, павших от сальмонеллеза, выявляют изменения в структуре слизистой оболочки кишечника. В тонком отделе кишечника – изменения, характерные для острого серозного или серозно-слизистого катара с участками десквамации эпителия, ворсинок и желёз. В толстом отделе кишечника фиксируют катарально-фибринозное, реже дифтеритическое воспаление с развитием некроза покровного эпителия и, частично, поверхностного слоя слизистой оболочки. В таких участках обнаруживают отслоение поверхностного слоя слизистой и эрозии . Аналогичную картину иногда отмечают на слизистой оболочке желчного пузыря .

Слепая кишка и илеоцекальный переход – специфическое место нахождения сальмонелл. Кроме того, инфильтрация сальмонелл через базальную мембрану в тонкую кишку происходит за счет макрофагов .

При гистологическом исследовании на срезах из селезёнки отмечают гиперплазию лимфоидных фолликулов белой пульпы. В почках при сальмонеллезе фиксируют зернистую дистрофию эпителия извитых канальцев. В печени на фоне дистрофических изменений выявляют очаговый коагуляционный некроз гепатоцитов, расширение желчных капилляров и заполнение их желчью, сильную капиллярную и венозную гиперемию с множеством мелких кровоизлияний между балками, а также диапедез элементов крови через стенки набухших сосудов .

Морфологические изменения в тимусе исследователи характеризуют расширением мозговой и сужением корковой зоны тимуса, появлением телец Гассаля .

В лёгких патологоанатомические признаки при сальмонеллезе птиц характеризуются картиной очаговой катаральной пневмонии. В миокарде павших птиц отмечают дистрофию с очагами коагуляционного некроза . Г.С. Качмазов и В.А. Радченко (1990 г.) при сальмонеллёзе, вызываемом S. enteritidis, отмечали также серозный или серозно-фибринозный эпикардит и перикардит в стадии организации с очаговым разрастанием соединительной ткани .

Небольшие воспалительные процессы с гетерофильной инфильтрацией в центральной части организма при инфицировании S. enteritidis происходят в виде очаговых процессов и диффузного их распространения, что часто отмечают в яичнике кур .

На основании эпизоотологических данных, клинических признаков и патоморфологических изменений ставят предварительный диагноз на сальмонеллёз .

Одним из составляющих диагностического комплекса являются серологические исследования. Развитие молекулярной биологии, генной инженерии позволило предложить для диагностики сальмонеллеза ряд высокочувствительных реакций. Серологические методы представлены реакцией латексагглютинации для диагностики сальмонеллеза-энтеритидис и пуллороза-тифа кур, набор для которой выпускается НПФ «Диавак». Кровь для постановки реакции агглютинации берут у птицы из гребня или подкрыльцовой вены.

Реакцию считают положительной, а птицу инфицированной, если в течение мин. в капле крови с антигеном латексным образуется хорошо заметный агглютинат (хлопья) голубого или белого цвета, а в жидкости отмечают просветление .

Утвержден и применяется набор для выявления антител к бактериям рода Salmonella в сыворотке крови кур методом иммуноферментного анализа (ИФА). Сущность метода заключается в выявлении комплекса антигенантитело, образовавшегося на поверхности лунок полистиролового планшета. Специфический комплекс взаимодействует с антивидовым иммунопероксидазным конъюгатом против Ig G кур и вызывает разложение субстрата, окрашивая содержимое лунок планшета. Интенсивность окраски прямо пропорциональна концентрации антител в исследуемом материале .

Полимеразная цепная реакция – метод амплификации in vitro, с помощью которого в течение нескольких часов можно выделить и размножить определенную последовательность ДНК в количестве, превышающем исходную в миллионы раз. Во Всероссийском государственном научноисследовательском институте контроля, стандартизации и сертификации ветеринарных препаратов разработана тест-система «САЛКОМ» для диагностики сальмонеллеза методом ПЦР. Тест-система предназначена для выявления ДНК бактерий рода Salmonella в крови, молоке, фекалиях, продуктах убоя животных, мясных продуктах и кормах животного и растительного происхождения. Особенностями являются высокая чувствительность метода – бактерий в 1 мл исследуемой пробы и его специфичность – 100 %.

ПЦР позволяет проводить экспресс-диагностику сальмонеллеза у птиц, исследуя фекалии, что полностью исключает травмирование птицы.

ПЦР обладает высокой чувствительностью и, в то же время, не требует подобно серологическим методам наличия иммунного ответа на проникновение возбудителя в организм хозяина. Это дает возможность следить за ранними стадиями инфекционного процесса и выявлять латентную форму болезни .

Патологическим материалом для бактериологического исследования служат трупы птиц не позднее 12 часов после их гибели, либо консервированные 30%-ным водным раствором глицерина, фосфатно-буферным или глицерино-солевым раствором, и хранившиеся при 4-6С не более 24 часов.

Также с целью выделения сальмонелл делают высевы из хорионаллантоисной жидкости и желтка погибших эмбрионов.

Посевы из крови сердца, печени, желчи и костного мозга (большеберцовой и бедренной кости) трупов птицы осуществляют на МПБ, МПА, среду Эндо, которые инкубируют в термостате 18-20 часов при температуре 36-38С. Образцами для диагностического культивирования могут быть также яичник, яйцеводы, семенники, желточный мешок, сердце, почка, поджелудочная железа, синовиальная оболочка и глаз . Поскольку при всех заболеваниях, вызываемых патогенными сальмонеллами, происходит колонизация ими кишечника, целесообразно взять пробы тканей кишечника с содержимым для выделения сальмонелл .

Для культивирования используют также дифференциальнодиагностические и селективные среды: Плоскирева, Левина, висмутсульфитный агар, сальмонеллёзно-шигеллёзный агар, среду РаппопортаВассилиади, среды Гисса (цветной ряд) и другие.

Идентификацию выделенного возбудителя, имеющего типичный рост для сальмонелл на средах Эндо, Левина, Плоскирева и других дифференциальных, проводят с помощью микроскопии мазков, окрашенных по Граму, и в капельной реакции агглютинации на стекле с монорецепторными агглютинирующими сальмонеллёзными О- и Н-сыворотками. Серотипирование сальмонелл является экономичным, дает сопоставимые результаты в различных лабораториях, несет важную эпидемиологическую информацию .

Серотипирование проводится в соответствие со схемой антигенных формул сальмонелл Kauffmann-White, редактируемой и издаваемой референсцентром ВОЗ по изучению сальмонелл .

Патогенность выделенной культуры подтверждают по степени вирулентности постановкой биопробы на лабораторных животных (белых мышах, голубях, цыплятах) .

Во ВНИИ ветеринарной санитарии, гигиены и экологии разработан метод ускоренной индикации морганелл, сальмонелл и энтеропатогенных эшерихий с адгезивными антигенами в патологическом материале, кормах, объектах внешней среды в реакции коагглютинации. Реакция основана на взаимодействии золотистого стафилококка штамма Cowan-1, предварительно сенсибилизированного антителами специфической О-сыворотки или антиадгезивных сывороток, с О-антигенами сальмонелл, что приводит к образованию хорошо заметного агглютината на стекле спустя 1-3 мин. после смешивания компонентов .

«Гуляева Анна Федоровна ТРАВЯНЫЕ МЕЛКОЛИСТВЕННЫЕ ЛЕСА КУЗНЕЦКОЙ КОТЛОВИНЫ: СИНТАКСОНОМИЯ, ЭКОЛОГИЯ, ГЕОГРАФИЯ 03.02.01 – Ботаника ДИССЕРТАЦИЯ на соискание ученой степени кандидата биологических наук Научный руководитель д.б.н., ст.н.с. Н.Н. Лащинский Новосибирск - СОДЕРЖАНИЕ ВВЕДЕНИЕ.. Глава 1. ИСТОРИЯ ИЗУЧЕНИЯ РАСТИТЕЛЬНОСТИ КУЗНЕЦКОЙ...»

«АХМАДУЛЛИН РУСТЕМ ШАМИЛЕВИЧ ЭКОЛОГО-БИОЛОГИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА ИВЫ БЕЛОЙ (SALIX ALBA L.) В УСЛОВИЯХ УФИМСКОГО ПРОМЫШЛЕННОГО ЦЕНТРА Специальность: 03.02.01 – ботаника Диссертация на соискание ученой степени кандидата биологических наук Научный руководитель: Доктор биологических наук, доцент Зайцев Г.А....»

«Цвиркун Ольга Валентиновна ЭПИДЕМИЧЕСКИЙ ПРОЦЕСС КОРИ В РАЗЛИЧНЫЕ ПЕРИОДЫ ВАКЦИНОПРОФИЛАКТИКИ. 14.02.02 – эпидемиология ДИССЕРТАЦИЯ на соискание ученой степени доктора медицинских наук Научный консультант: заслуженный деятель науки РФ, лауреат Государственной премии СССР профессор, доктор медицинских наук Ющенко Галина Васильевна Москва – Содержание...»

«Ланцова Ирина Владимировна 0520.0 900876ГЕОЭКОЛОГИЧЕСКАЯ ОЦЕНКА И РАЦИОНАЛЬНОЕ ИСПОЛЬЗОВАНИЕ РЕКРЕАЦИОННОГО ПОТЕНЦИАЛА БЕРЕГОВЫХ ЗОН ВОДОХРАНИЛИЩ Специальность: 25.00.36 - Геоэкология диссертация на соискание учёной степени доктора географических наук Научный консультант: д.г.н. В.Н. Салтанкин Москва 2009 СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ Стр. ВВЕДЕНИЕ ГЛАВА 1...»

«Ларионова Мария Сергеевна РЕСУРСОСБЕРЕГАЮЩАЯ ТЕХНОЛОГИЯ ВОЗДЕЛЫВАНИЯ ПОДСОЛНЕЧНИКА В ЗОНЕ ЧЕРНОЗЁМНЫХ ПОЧВ ВОЛГОГРАДСКОЙ ОБЛАСТИ Специальность 06.01.01- Общее земледелие, растениеводство Диссертация на соискание учёной степени кандидата сельскохозяйственных наук Научный руководитель: д.т.н., доцент Юдаев Игорь Викторович...»

«Сорокина Александра Валентиновна СОВЕРШЕНСТВОВАНИЕ МЕТОДОВ СДЕРЖИВАНИЯ ВОСПРОИЗВОДСТВА БЕЗДОМНЫХ ЖИВОТНЫХ В КРУПНЫХ НАСЕЛЕННЫХ ПУНКТАХ 16.00.06 - Ветеринарная санитария, экология, зоогигиена и ветеринарно-санитарная экспертиза Диссертация на соискание ученой степени кандидата биологических наук Научный руководитель: д. с.-х. н., проф. Степанов В.И. П....»

«Працун Элина Валерьевна РАЗВИТИЕ ЗДОРОВЬЕСБЕРЕГАЮЩЕЙ КОМПЕТЕНТНОСТИ ПЕДАГОГОВ В ОБРАЗОВАТЕЛЬНОЙ ИНФРАСТРУКТУРЕ РЕГИОНА Специальность 13.00.08 – теория и методика профессионального образования Диссертация на соискание ученой степени кандидата педагогических наук Научные руководители: доктор педагогических наук, профессор О.Г. Красношлыкова; доктор биологических наук,...»

«КУРАНОВА Мирья Леонидовна Клеточные и молекулярные особенности проявления атаксиителеангиэктазии 03.03.04- Клеточная биология, цитология, гистология Диссертация на соискание учёной степени кандидата биологических наук Научный руководитель: Кандидат биологических наук, Спивак Ирина Михайловна Санкт-Петербург Оглавление Список основных сокращений. Введение.. I.Обзор литературы.....»

Чердаков Виктор Юрьевич ФАРМАКОЛОГИЧЕСКИЕ ЭФФЕКТЫ РЕГУЛЯТОРНЫХ ПЕПТИДОВ ПРИ ТРАВМАХ КОЖИ И КОСТЕЙ Специальность: 14.03.06 – фармакология, клиническая фармакология Диссертация на соискание ученой степени кандидата медицинских наук Научные руководители: Смахтин М.Ю., доктор биологических...»

«Пономарева Марина Владиславовна ИНТРАТЕКАЛЬНЫЙ СИНТЕЗ ИММУНОГЛОБУЛИНОВ И ДИСФУНКЦИОНАЛЬНЫЕ НАРУШЕНИЯ ГЕМАТОЭНЦЕФАЛИЧЕСКОГО/ГЕМАТОЛИКВОРНОГО БАРЬЕРА ПРИ СИФИЛИТИЧЕСКОЙ ИНФЕКЦИИ 14.03.09 – Клиническая иммунология, аллергология (биологические наук и) диссертация на соискание ученой степени кандидата...»

«Аслаханов Саид-Али Махмудович ПЕДАГОГИЧЕСКАЯ КОНЦЕПЦИЯ РАЗВИТИЯ СИСТЕМЫ ФИЗИЧЕСКОГО ВОСПИТАНИЯ ЭТНОФОРОВ НА ОСНОВЕ БАЗОВЫХ ЦЕННОСТЕЙ ЭТНОПЕДАГОГИКИ 13.00.04 – Теория и методика физического воспитания, спортивной тренировки, оздоровительной и адаптивной физической культуры Диссертация на соискание учёной степени доктора...»

«АНФИМОВА ЛЮДМИЛА ВИКТОРОВНА ФЕНОТИПИЧЕСКИЕ ОСОБЕННОСТИ ГОЛШТИНИЗИРОВАННОГО ЧЁРНО – ПЁСТРОГО СКОТА РАЗНЫХ ГЕНЕТИЧЕСКИХ ГРУПП 06.02.07 – разведение, селекция и генетика сельскохозяйственных животных ДИССЕРТАЦИЯ на соискание ученой степени кандидата сельскохозяйственных наук Научный руководитель доктор сельскохозяйственных наук, профессор...»

«Савин Константин Сергеевич Применение дезинфектанта нового поколения Педилайн для профилактики заболеваний копытец крупного рогатого скота 06.02.05 – ветеринарная санитария, экология, зоогигиена и ветеринарно-санитарная экспертиза Диссертация на соискание ученой степени кандидата...»

03.02.08 – экология Диссертация на соискание ученой степени кандидата биологических наук Научный руководитель: доктор...»

«Гасилина Вера Александровна Ветеринарно-санитарная экспертиза мяса индеек промышленного и домашнего способов выращивания в условиях Красноярского края 06.02.05 – ветеринарная санитария, экология, зоогигиена и ветеринарно-санитарная экспертиза ДИССЕРТАЦИЯ на соискание...»

«. Петров Михаил Алексеевич Влияние иммунных факторов на воспроизводительную функцию коров 06.02.06 – ветеринарное акушерство и биотехника репродукции животных. Диссертация на соискание ученой степени кандидата ветеринарных наук Научный руководитель: академик РАСХН, доктор биологических наук,...»

Основные научные положения, сформулированные автором на основании проведенных исследований:

1. Этиологическая структура сальмонеллеза птиц разных видов в сравнительном аспекте.
2. Технология производства вакцины инактивированной полиэтиленгликолевой против сальмонеллеза голубей, ее свойства и эффективность применения.
3. Морфологическая характеристика, биологические, адсорбционные свойства и антигенное родство бактериофагов Phagum Salmonella typhimurium.
4. Технология производства и эффективность применения Бактериофага тифимуриум против сальмонеллеза голубей и бивалентного бактериофага против сальмонеллеза птиц.
5. Биологические свойства вируса ньюкаслской болезни «PN-T».
6. Технология производства и протективная эффективность вакцины «Виросальм» ассоциированной инактивированной против сальмонеллеза и болезни Ньюкасла голубей и декоративных птиц.
7. Усовершенствованная система противоэпизоотических мероприятий против сальмонеллеза птиц разных видов, включающая метод селективной деконтаминации и способы профилактики сальмонеллеза птиц с использованием разработанных препаратов бактериофагов и вакцин.

1. Куриленко А.Н., Пименов Н.В., Ленев С.В., Толпыгин М.А. Специфическая профилактика сальмонеллеза кур // Ветеринарная медицина. – 2002. – № 2. – С. 29-30.

2. Пименов Н.В., Бубнова Л.В. Бактерии рода Salmonella – этиологический фактор острых кишечных расстройств у серых ворон // Ветеринарная медицина. – 2002. – № 2. – С. 29.

3. Куриленко А.Н., Пименов Н.В., Ленев С.В., Малахов Ю.А., Яковлев С.С. Рекомендации по диагностике, профилактике и ликвидации сальмонеллеза кур. – М.: МСХ-МГАВМиБ. – 2002. – 34 с.

4. Пименов Н.В., Ленев С.В., Куриленко А.Н. Протективная активность бивалентного сальмофага против сальмонеллеза энтеритидис и пуллороза-тифа кур // Сб. науч. трудов ВГНКИ. – М.: ФГУ ВГНКИ, 2003. – Т. 64. – С. 178-182.

5. Пименов Н.В., Ленев С.В., Малахов Ю.А., Куриленко А.Н. Новый этап в совершенствовании профилактики и лечения сальмонеллеза кур // Мат-лы XI Московского международного вет. конгресса. – М.: Асс. практ. вет. врачей, 2003. – С. 228-229.

6. Пименов Н.В., Капустин А.В. Смешанная инфекция – сальмонеллез и болезнь Нью-Касла голубей // Ветеринарная медицина. – 2004. – № 4. – С. 23-24.

7. Данилевская Н.В., Пименов Н.В. Проблема антибиотикорезистентности на примере лечения сальмонеллеза у домашних голубей // Российский ветеринарный журнал. – 2005. – № 4. – С. 21-24.

8. Пименов Н.В. Основные направления борьбы с сальмонеллезом голубей // Вклад молодых ученых в решение проблем аграрной науки: Мат-лы межрег. науч.-практ. конф. мол. уч. – Воронеж: ФГОУ ВПО «ВГАУ им. К.Д. Глинки», 2005. – Ч. 2. – С. 144-147.

9. Пименов Н.В., Данилевская Н.В. Антибиотикорезистентность сальмонелл, выделенных у домашних голубей // Ветеринария. – 2006. – № 9. – С. 20-24.

10. Пименов Н.В. Эпизоотологические особенности сальмонеллеза голубей // Мат-лы XIII Московского международного конгресса по бол. мелк. дом. жив. – М.: Асс. практ. вет. врачей, 2005. – С. 153-155.

11. Пименов Н.В. Сальмонеллез синантропных птиц – проблема токсикоинфекций человека // Проблемы рационального природопользования техногенного региона: Сб. науч. тр. Междунар. шк.-конф. – Кемерово: ФГОУ ВПО КГСХИ, 2006. – С. 206-210.

12. Данилевская Н.В., Пименов Н.В. Новое в антибиотикотерапии: антибиотикорезистентность – угроза реальна // Новейшие разработки в ветеринарии. Клеточная терапия: Мат-лы совм. конф. – М.: ГУ РОНЦ им. Н.Н. Блохина РАМН, 2006. – С. 16-22.

13. Пименов Н.В., Чиркова И.В. Биологические свойства бактериофагов Salmonella typhimurium и их терапевтическая эффективность против сальмонеллеза голубей // Молодежь и наука XXI века: Мат-лы II Открытой Всеросс. науч.-практ. конф. мол. уч. – Ульяновск: ФГОУ ВПО УГСХА, 2007. – Ч. 1. – С. 336-340.

14. Пименов Н.В., Чиркова И.В. Специфическая профилактика сальмонеллеза голубей // Голубеводство.–2007.–№ 12.–С.29; 2008.– №1.– С.29.

15. Пименов Н.В., Чиркова И.В. Фаговыделение, профилактика и терапия сальмонеллеза голубей // Ветеринария. – 2007. – № 10. – С. 24-28.

16. Пименов Н.В. Создание и необходимость применения инактивированной вакцины против сальмонеллеза и болезни Нью-Касла голубей // Ветеринарная медицина. – 2008. – № 2-3. – С. 11-12.

17. Пименов Н.В., Куриленко А.Н., Чиркова И.В., Яковлев С.С. Рекомендации по диагностике, профилактике и ликвидации сальмонеллеза голубей. – М.: МСХ; «МегАрт» – 2008. – 43 с.

18. Чиркова И.В., Пименов Н.В. Биологические свойства бактериофагов против сальмонелл тифимуриум и их использование в борьбе с сальмонеллезом птиц // Ветеринария и кормление.– 2008.– № 3. – С.32-34.

19. Пименов Н.В. Перспективы применения бактериофагов в ветеринарии // Ветеринария и кормление. – 2009. – № 5. – С. 34-35.

20. Желудева Е.В., Пименов Н.В. Человек и природа: «биологическое» и «социальное» // Вопросы ветеринарии и ветеринарной биологии: Сб. науч. тр. мол. уч. – М.: ФГОУ ВПО МГАВМиБ, 2009. – Вып. 5. – С. 206-210.

21. Пименов Н.В., Бурико Б.Ю. Основные методы борьбы с ньюкаслской болезнью в голубеводстве // Вопросы ветеринарии и ветеринарной биологии: Сб. науч. тр. мол. уч. – М.: ФГОУ ВПО МГАВМиБ, 2009. – Вып. 5. – С. 132-138.

22. Пименов Н.В., Чиркова И.В. Препарат против сальмонеллеза голубей и способ лечения сальмонеллеза голубей: Патент на изобретение №2366456 // Официальный бюллетень Федеральной службы по интеллектуальной собственности. – 2009. – № 25.

23. Пименов Н.В. Вирус для изготовления инактивированной полиэтиленгликолевой вакцины против сальмонеллеза и болезни Нью-Касла голубей // Вопросы ветеринарии и ветеринарной биологии: Сб. науч. тр. мол. уч. – М.: ФГОУ ВПО МГАВМиБ, 2009. – Вып. 5. – С. 138-141.

24. Пименов Н.В. Распространенность инфекционных болезней в голубеводстве // Ветеринария и кормление. – 2009. – № 6. – С. 69-70.

25. Пименов Н.В., Чиркова И.В., Субботин В.В., Данилевская Н.В. Способ лечения птиц при сальмонеллезе, вызванном Salmonella typhimurium: Патент на изобретение №2375075 // Официальный бюллетень Федеральной службы по интеллектуальной собственности.– 2009. – №34.

26. Пименов Н.В. Вакцина инактивированная против сальмонеллеза голубей и способ ее применения: Патент на изобретение №2377015 // Официальный бюллетень Федеральной службы по интеллектуальной собственности. – 2009. – № 36.

27. Пименов Н.В. Антигенные и иммуногенные свойства вакцины «Виросальм» инактивированной ассоциированной против сальмонеллеза и болезни Ньюкасла птиц // Мат-лы междунар. науч.-практ. конф. «Молодость, талант, знания – ветеринарной медицине и животноводству». – М.-Троицк: ФГОУ ВПО УГАВМ, 2010. – Т. 3. – С. 107-112.

28. Пименов Н.В. Молодые предлагают новые методы и препараты // Информационный бюллетень Минсельхоза России.– 2010.– № 4.– С.50-52.

29. Пименов Н.В. Сальмонеллез птиц: перспективные направления в лечебно-оздоровительных мероприятиях // Ветеринария и кормление. – 2010. – № 3. – С. 24-25.

30. Пименов Н.В. Диагностика, профилактика и меры борьбы с основными инфекциями в голубеводстве. – М.: Колос, 2010. – 96 с.

31. Желудева Е.В., Пименов Н.В. Проблемы экологии: способность мыслить в общепланетарном масштабе // Вопросы ветеринарии и ветеринарной биологии: Сб. науч. тр. мол. уч. – М.: ФГОУ ВПО МГАВМиБ, 2011. – Вып. 7. – С. 275-277.

32. Пименов Н.В. Инновационный метод профилактики сальмонеллеза и ньюкаслской болезни птиц в условиях мелких и средних хозяйств // Актуальные проблемы развития АПК в научных исследованиях молодых ученых: Труды Всерос. совета мол. уч. и спец-тов аграрных образовательных и научных учреждений. – М.: МСХ РФ, 2011. – С. 146-149.

33. Пименов Н.В., Зотова З.В. Иммунобиологические свойства вакцины «Виросальм» в сравнении с живыми вакцинами против ньюкаслской болезни у голубей // Вопросы ветеринарии и ветеринарной биологии: Сб. науч. тр. мол. уч. – М.: ФГОУ ВПО МГАВМиБ, 2011.– Вып.7.– С. 164-178.

34. Желудева Е.В., Пименов Н.В. Социальная экология: аксиологическая переориентация сциентизированного мышления // Вопросы ветеринарии и ветеринарной биологии: Сб. науч. тр. мол. уч. – М.: ФГОУ ВПО МГАВМиБ, 2011. – Вып. 7. – С. 278-280.

35. Зотова З.В., Пименов Н.В. Проблема ньюкаслской болезни голубей и пути ее решения // Ветеринария и кормление.– 2011.– № 5.– С.35-36.

36. Пименов Н.В. Бивалентный сальмофаг против сальмонеллеза птиц // Вопросы ветеринарии и ветеринарной биологии: Сб. науч. тр. мол. уч. – М.: ФГОУ ВПО МГАВМиБ, 2011. – Вып. 7. – С. 168-174.

37. Пименов Н.В. Вакцина «Виросальм» – новый биопрепарат для специфической профилактики сальмонеллеза и болезни Ньюкасла птиц // Инновационные тенденции развития Российской науки: Мат-лы IV Междунар. науч.-практ. конф. мол. уч. – Красноярск: ФГОУ ВПО «Красноярский ГАУ», 2011. – Ч. 1. – С. 139-142.

38. Зотова З.В., Пименов Н.В. Факторы риска распространения эпизоотии ортомиксвирусной и парамиксвирусной инфекций птиц в Московской области // Вопросы ветеринарии и ветеринарной биологии: Сб. науч. тр. мол. уч.– М.: ФГОУ ВПО МГАВМиБ, 2011. – Вып. 7. – С. 145-151.

39. Пименов Н.В. Специфическая эффективность вакцины «Виросальм» ассоциированной инактивированной против сальмонеллеза и болезни Ньюкасла птиц // Молодежь и инновации – 2011: Мат-лы Междунар. науч.-пр. конф. – Горки: Белорусская ГСХА, 2011. – Ч. 1. – С.309-312.

40. Пименов Н.В. Новые пути решения медико-социальной проблемы сальмонеллеза птиц // Жизнь без опасностей.– 2011.– № 2.– Т. 6.– С. 56-60.

41. Пименов Н.В., Зотова З.В. Конструирование вакцины «Виросальм» на основе парамиксовируса типа 1 голубиного варианта штамма «PN-T» // Ветеринарный врач. – 2011. – № 4. – С. 2-4.

42. Пименов Н.В., Зотова З.В. Методические рекомендации по недопущению распространения гриппа птиц и болезни Ньюкасла голубей в частных подворьях, птицеводческих хозяйствах и голубятнях. – М.: ФГБОУ ВПО МГАВМиБ. – 2011. – 56 с.

43. Пименов Н.В. Новые методы и средства в борьбе с сальмонеллезом птиц // Вопросы ветеринарии и ветеринарной биологии: Сб. науч. тр. мол. уч. – М.: ФГБОУ ВПО МГАВМиБ, 2012. – Вып. 8. – С. 138-143.

44. Пименов Н.В. Эффективность оздоровительных мероприятий против сальмонеллеза птиц в условиях зоопарка // Российский ветеринарный журнал. – 2012. – № 3. – С. 22-24.

45. Пименов Н.В. Вакцинопрофилактика сальмонеллеза голубей и декоративных птиц // Ветеринария. – 2012. – № 8. – С. 20-22.

46. Пименов Н.В. Совершенствование средств и методов борьбы с сальмонеллезом птиц // Ветеринария и кормление. – 2012. – № 4.– С.32-33.

47. Пименов Н.В. Эффективность метода селективной деконтаминации в условиях пунктов содержания птицы, неблагополучных по сальмонеллезу // Вопросы ветеринарии и ветеринарной биологии: Сб. науч. тр. мол. уч. – М.: ФГБОУ ВПО МГАВМиБ, 2012. – Вып. 8. – С. 143-147.

48. Пименов Н.В. Совершенствование системы противоэпизоотической борьбы с сальмонеллезом птиц // Ветеринарная медицина. – 2012. – № 3. – С. 38-40.

480 руб. | 150 грн. | 7,5 долл. ", MOUSEOFF, FGCOLOR, "#FFFFCC",BGCOLOR, "#393939");" onMouseOut="return nd();"> Диссертация - 480 руб., доставка 10 минут , круглосуточно, без выходных и праздников

240 руб. | 75 грн. | 3,75 долл. ", MOUSEOFF, FGCOLOR, "#FFFFCC",BGCOLOR, "#393939");" onMouseOut="return nd();"> Автореферат - 240 руб., доставка 1-3 часа, с 10-19 (Московское время), кроме воскресенья

Пименов Николай Васильевич. Эффективность бивалентного сальмофага против сальмонеллеза энтеритидис и пуллороза-тифа кур: диссертация... кандидата биологических наук: 16.00.03.- Москва, 2003.- 138 с.: ил. РГБ ОД, 61 03-3/810-6

Введение

2. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ 10

2.1. Этиологические особенности сальмонеллеза кур 10

2.1.1. Характеристика возбудителя 10

2.1.2. Эпизоотологические данные 14

2.1.3. Клинические признаки 16

2.1.4. Патологоанатомические изменения 18

2.2. Специфическая профилактика сальмонеллеза кур 22

2.3. Природа бактериофагов и их использование при бактериальных инфекциях птиц 24

2.3.1. Морфология и структура бактериофагов, их классификация 25

2.3.2. Фазы «фаговой инфекции» 29

2.3.3. Применение фагов при сальмонеллезах 36

3. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ 43

ЗЛ. Материалы и методы 43

3.2. Результаты собственных исследований 52

3.2.1. Эпизоотическая ситуация по сальмонеллезу кур 52

3.2.2. Характеристика изолятов сальмонелл 55

3.2.3. Экспериментальная инфекция сальмонеллеза цыплят 63

3.2.4. Выделение и изучение бактериофагов к Б. ег^егШсНБ 68

3.2.5. Профилактические и лечебные свойства фагового компонента бивалентного сальмофага против сальмонеллеза энтеритидис и пулло- роза-тифа кур в лабораторных условиях 75

3.2.6. Протективные свойства вакцинного компонента энтеритидис бивалентного сальмофага в лабораторных условиях 82

3.2.7. Изучение протективных свойств бивалентного сальмофага за счет вакцинного компонента пуллорум и определение оптимальной дозы его применения 83

3.2.8. Производственные испытания бивалентного сальмофага 87

4. ОБСУЖДЕНИЕ ПОЛУЧЕННЫХ РЕЗУЛЬТАТОВ 96

5. ВЫВОДЫ 105

6. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ 108

7. СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННОЙ ЛИТЕРАТУРЫ 109

Введение к работе

Актуальность темы. Развитие производства продуктов питания, получаемых от сельскохозяйственной птицы, неизбежно связано с интенсификацией промышленного птицеводства, увеличением производственных мощностей и, как следствие, плотности посадки птицепоголовья. Увеличение в последние годы токсичности кормов при сохранении массированной стресс- нагрузки на птицу, особенно цыплят первых дней жизни, привело к повышению эпизоотологической значимости инфекций энтеробактериального происхождения, среди которых одно из важнейших мест принадлежит сальмо- неллезу. Особенность течения сальмонеллеза у молодняка кур - септицемия. Взрослая птица является скрытым бактерионосителем, что служит критерием стационарности инфекции и усложняет борьбу с ней (11,13,17,19,25,26,32,35, 38,39,43,49,54,55,58,60,76,78,84,91,93,115,121,132,151).

Птицеводческие хозяйства, сталкиваясь с проблемой сальмонеллеза кур, несут большие потери из-за смертности цыплят, снижения продуктивности и качества продукции (17,19,37,43,84,132).

Обсемененные сальмонеллами яйца и мясо кур становятся зачастую причинами пищевых токсикоинфекций человека (20,25,26,36,37,50,51, 69,75,83,117,118,126,137,142,145,147,150,152,154,159). Согласно медицинской статистике токсикоинфекции сальмонеллезной этиологии распространены почти во всех странах мира, причем за последнее двадцатилетие медицина отмечает рост сальмонеллезных заболеваний среди людей, что обусловлено, в первую очередь, ростом инфицированности домашних животных и птиц (101,132,140,162).

Так, в США в 1998 году было отмечено более 20 вспышек сальмонеллеза, особенно среди потребителей и работников баров и ресторанов (140). Б. Ьикттаа, Я. 8сЫШ1, Т. 11т1:Ша сообщали о 12 вспышках сальмонеллеза в Финляндии в 1997 году (137). В Великобритании было зарегистрировано в 1989 году 5 сальмонеллезных вспышек; обсемененные сальмонеллой яйца и тушки птицы обнаружили в магазинах, что привело к отставке министра сельского хозяйства Е. Curie. Т.К. Kolferstein и D.W. Bettcher отмечают, что за 1993 г. только в США число случаев токсикоинфицирования человека составило 224000, из них 96% - сальмонеллез, причиной которого были в 65% случаев зараженное мясо птицы и яичные продукты (140).

Не менее важная эпидемиологическая значимость сальмонеллеза кур в пищевом токсикоинфицировании человека и увеличение числа вспышек этого заболевания отмечаются в Дании, Германии, Канаде, Швейцарии, Италии, Замбии, Гане, Сенегале и многих других странах, в т.ч. и в Российской Федерации (11,13,20,25,26,36,49,51,55,96,101,115,126,140,145,150,152,156,162).

Борьба с сальмонеллезом кур заключается в проведении организационных, санитарно-гигиенических мероприятий, серологическом выявлении подозреваемых в заражении или бактерионосительстве кур, проведении терапевтических мероприятий (профилактические и лечебные обработки птиц антибиотиками и другими химиотерапевтическими препаратами) (15,16,17, 18,19,31,32,33,38,42,43,49,54,58,63,66,75,78,84,94,115,132).

К сожалению, эффективность этих мероприятий недостаточна. Перечисленные обработки не позволяют избавить птицу от сальмоносительства, не способны профилактировать и ликвидировать инфекцию, а предотвращают лишь массовое клиническое проявление заболевания среди молодняка птиц. Кроме того, применение химиотерапевтических препаратов несет ограничения на использование продукции, постоянные антибиотикообработки не оправданы с экологической точки зрения (20,33,37,60,76).

Вышесказанное свидетельствует о необходимости специфической профилактики сальмонеллеза кур. Работа над созданием вакцин проводится с 50- х гг. прошлого столетия. В разных странах были предложены живые, инакти- вированные и химические вакцины против сальмонеллеза кур, однако они не решают проблему защиты цыплят первых дней жизни и санирования птице- поголовья от бактерионосительства. Вот почему в последнее время возрос интерес к фаговым препаратам. Бактериофаги лизируют эпизоотические штаммы сальмонелл, к которым они специфичны, применение фагов снимает бактерионосительство, не имеет противопоказаний (4,15,28,45,54,60,61,77, 79,95,147,155).

В лаборатории контроля и стандартизации препаратов против сальмо- неллеза, колибактериоза и лептоспироза ВГНКИ создан препарат нового типа - сальмофаг энтеритидис, объединивший в себе высокоактивный бактериофаг, лизирующий эпизоотические штаммы S. enteritidis наиболее распространенных фаготипов, и фагоустойчивый вакцинный штамм данного серовара. Применение препарата позволяет освободить птицу от сальмонеллы за счет фагового компонента препарата, защитить иммунотолерантных цыплят первых дней жизни от инфекции, пока они не выработают собственный поствакцинальный иммунитет к сальмонеллезу, вызываемому S. enteritidis (59,61).

Препарат нового поколения - бивалентный сальмофаг, создаваемый в той же лаборатории, объединил в себе уже два фаговых компонента против S. enteritidis и S. gallinarum-pullorum, и, соответственно, два фагоустойчивых вакцинных штамма данных сероваров.

Данные 1989-2001 гг. свидетельствуют, что основными этиопатогенны- ми сероварами сальмонелл для кур являются Salmonella enteritidis (ее выделяют в 44-46% случаев из патологического материала от птицы, павшей от сальмонеллеза) и S. gallinarum-pullorum (ее доля в случаях сальмонеллеза кур 41-43%). Далее следует S. typhimurium (8-10%), S. dublin (1-2%). Роль остальных сальмонелл (Ss. virchow, infantis, hamburg, haifa, panama, kottbus, bo- vis morbificans, colindale, Chester, derby, brandenburg, newlands, tshiongeve, lindenburg, thompson, dahomey, banana, omderman, anatum, paratyphi В и других) в этиологии сальмонеллеза кур незначительна и изменчива (6,11,17,19,20, 23,35,38,54,100,105,127).

Тем самым необходимость создания бивалентного сальмофага продиктована производственной реальностью и является актуальной задачей. Применение бивалентного сальмофага позволит защитить кур и цыплят от основных возбудителей сальмонеллеза с первых дней жизни, решить проблемы сальмоносительства, вспышки сальмонеллеза при иммунизации по инфицированному фону, большого применения антибиотиков.

До настоящей работы оставались не изученными некоторые аспекты эпизоотологического процесса при сальмонеллезе кур, эффективность сальмофага в острых лабораторных опытах, производственных испытаниях, не отработана оптимальная дозировка по вакцинному компоненту 8. аШпагит- риПогит, не изучено влияние применения препарата на показания утвержденных основных диагностических серологических тестов при сальмонеллезе.

Цель и задачи исследований. Целью настоящей работы явилось изучение эффективности бивалентного сальмофага против сальмонеллеза энте- ритидис и пуллороза-тифа кур.

Для достижения поставленной цели были определены следующие задачи работы:

изучить эпизоотическую ситуацию по сальмонеллезам птиц в Российской Федерации;

изучить свойства изолятов сальмонелл, выделенных в различных регионах РФ (в т.ч. их серовариантную принадлежность и антибиотикочувствительность);

выделить и селекционировать высокоактивные бактериофаги к Б. ег^егШсИв;

изучить зависимость развития сальмонеллеза кур от производственного направления, возраста, способа инфицирования птицы;

изучить особенности развития септицемии при сальмонеллезе энтеритидис и пуллорозе-тифе кур;

изучить протективиую и лечебную эффективность экспериментальных серий бивалентного сальмофага в лабораторных условиях;

определить оптимальную дозу применения вакцинного штамма 8. а1Нпашш-ри11огиш при обработке цыплят бивалентным сальмофагом;

изучить эффективность применения экспериментальных серий препарата бивалентный сальмофаг в птицеводческих хозяйствах, неблагополучных по сальмонеллезу кур.

Научная новизна. Изучена эпизоотическая ситуация по сальмонеллезам кур в Российской Федерации. Обоснованы особенности проявления сальмо- неллеза кур от этиопатогенного серовара, зависимость инфицирующей дозы от производственного направления, возраста птицы и способа инфицирования, изучена эффективность применения нового препарата - бивалентного сальмофага против сальмонеллеза энтеритидис и пуллороза-тифа кур в лабораторных и производственных условиях, отработана доза применения его вакцинного компонента пуллорум.

Практическая ценность работы. На основании проведенных исследований рекомендован для внедрения в биологическую промышленность и ветеринарную практику «Бивалентный сальмофаг против сальмонеллеза энтеритидис и пуллороза-тифа кур» с установленной лечебной и профилактической эффективностью.

Выделены и селекционированы активные бактериофаги к Б. егЛегШсИэ, служащие резервом фагового компонента препарата бивалентный сальмофаг.

Апробация работы. Основные положения диссертации успешно доложены на Международной конференции молодых ученых «Научные основы технологии производства ветеринарных биопрепаратов» во Всероссийском научно-исследовательском и технологическом институте биологической промышленности (Щелково, 05.12.2002.), заседаниях кафедры клинической диагностики и болезней молодняка, методическом совещании факультета повышения квалификации, межкафедральных заседаниях МГАВМиБ имени К.И. Скрябина.

Основные положения диссертационной работы, выносимые на защиту:

Эпизоотическая ситуация по сальмонеллезу кур в РФ.

Выделение и свойства этиопатогенных изолятов сальмонелл, выделение и селекция бактериофагов к Б. е^егШсИБ.

Особенности проявления сальмонеллеза кур.

Определение оптимальной дозы применения вакцинного компонента пуллорум бивалентного сальмофага.

Оценка протективной и лечебной эффективности бивалентного сальмофага против сальмонеллеза энтеритидис и пуллороза-тифа кур в лабораторных экспериментах и производственных испытаниях.

Объем и структура диссертации. Диссертационная работа изложена на 125 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, собственных исследований, обсуждения и выводов. Библиографический список включает 163 публикации, из них 69 зарубежных источников. Материалы иллюстрированы 5 электронно-микроскопическими фотографиями, 22 таблицами, 3 графиками, 5 диаграммами. Работа содержит документальное приложение.

2. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ 2.1. Этиологические особенности сальмонеллеза кур

Сальмонеллез кур - инфекционная болезнь, характеризующаяся у молодняка явлениями септицемии, поражением органов дыхания и желудочно- кишечного тракта, а у взрослых кур - хроническим течением с поражением репродуктивных органов и бактерионосительством.

2.1.1. Характеристика возбудителя

На сегодняшний день насчитывается более 2500 сероваров сальмонелл, которые разделены по антигенному родству на 52 серологические группы. В пределах каждого серовара сальмонеллы подразделяются на биовары, фаго- вары, кроме того, они различаются по характеру продуцируемого бактерио- цина (53,57,82,121,135,139,151).

Подвид enterica (choleraesuis);

Подвид salamae;

Подвид arizonae Illa и Illd;

Подвид diarizonae;

Подвид houtenae;

Подвид indica (135).

Сальмонеллез, вызванный S. gallinarum-pullorum (ранее именовавшийся как отдельная нозологическая единица - пуллороз-тиф) и S. enteritidis, относящиеся к серогруппе D;

Сальмонеллез, вызванный S. typhimurium, поражающий, в основном, водоплавающую птицу;

Сальмонеллез птицы, вызываемый не адаптированными к птице се- роварами сальмонелл (Ss. haifa, anatum, london и другие) (19).

2.1.2. Эпизоотологические данные.

К возбудителю сальмонеллеза восприимчивы куры, а также другие виды животных и человек. Источником возбудителя инфекции являются больной молодняк птиц, взрослые куры-бактерионосители, а также индейки, цесарки (в основном, 8. gallinarum-pullorum), утки, индюки (8. еШегШсИБ, 8. 1урЫ- типит). Возможны другие виды птиц и животных как источники возбудителя инфекции. Кроме того, источником возбудителя сальмонеллеза кур являются снесенные ими яйца (латентная инфекция) (19,39,55,58,96), хотя некоторые ученые считают, что возбудитель сальмонеллеза птиц вертикальным путем не передается, а заражение инкубационных яиц возможно горизонтально при нарушениях режима инкубации, насечках, бое, микротрещинах (13).

Больная птица и бактерионосители выделяют наибольшее количество возбудителя с пометом. Факторами передачи возбудителя сальмонеллеза являются корма, вода, подстилка, кормушки, воздух, предметы ухода, почва, одежда и обувь обслуживающего персонала, а также инкубационные отходы. Первичный занос возбудителя на фермы чаще всего связан с завозом суточного молодняка, поступающего для выращивания из неблагополучных хозяйств, а также при заносе возбудителя с яйцом, необезвреженными боен- скими отходами, кормами. Повторные вспышки сальмонеллеза кур в неблагополучных по этой инфекции хозяйствах возникают при совместном содержании молодняка с более взрослой птицей - сальмонеллоносителями, пополнении стад из неблагополучных ферм, переводе птиц в инфицированные помещения или на выгулы (без надлежащей дезинфекции) (19,38,43,55,76, 84,115).

Сопутствующими факторами развития инфекции являются антисанитарные условия содержания, неполноценное и несбалансированное кормление, нарушение технологических схем кормления, скученное содержание, несоблюдение параметров оптимального микроклимата. В случае проникновения возбудителя на ферму в первую очередь заболевают слаборазвитые цыплята. Наблюдения показывают, что при появлении в хозяйстве сальмонеллеза, инфекция распространяется тем быстрее и дает больший отход, чем в менее благоприятных условиях кормления и содержания находится птица (19,38). Так, изучено, что при экспериментальном пероральном заражении молодняка птиц вирулентными культурами 8. егйегШсНз не всегда удается вызвать заболевание с типичными клиническими признаками и патологоанатомическими изменениями, если нет факторов, снижающих резистентность птицы (17,76).

Заражение кур происходит алиментарным, аэрогенным и трансовариаль- ным путями. Показано, что наиболее инвазионные сероварианты - Б. 1урЫ- типит и 8. еМегШсНз, которые могут проникать в яичник еще в процессе формирования скорлупы. Заражение цыплят сальмонеллами через респираторный тракт часто происходит на фоне вирусных инфекций: инфекционного ларинготрахеита, инфекционного бронхита и других, в том числе при иммунизации живыми вакцинными штаммами (124,125,146).

Инкубационный период болезни варьирует от нескольких до 12-14 суток и зависит от дозы попавшего возбудителя, сероварианта сальмонеллы и ее вирулентности (9,19,38,55,121,140).

При заражении восприимчивой птицы сальмонелл обнаруживали в кишечнике, нерассосавшемся желтке, печени, желчном пузыре, сердце, костном мозге, селезёнке, фабрициевой сумке, репродуктивных органах, головном мозге, а также в яйцах, снесённых больными курами (19,20,26,36,54, 55,57,76). По данным Радченко В.А. наиболее обсеменены 8. ег^егШсНБ у больных цыплят печень, селезенка, кровь из сердца, костный мозг и нерассо- савшийся желток (76). При изучении возможности овариального заражения, оказалось, что инфицированными могут быть до 6% яиц, полученных от клинически здоровой птицы (127).

Некоторые исследователи отмечают, что 8. ег^егШсНэ не является для птицы высоковирулентной, и эпизоотия развивается вяло, носит торпидный характер. Важнейшим местом накопления возбудителя является инкубатор, однако не все зараженные эмбрионы и вылупившиеся цыплята заболевают и гибнут. Цыплята, пережившие 12-дневный возраст, проявляют уже значительную устойчивость и, как правило, не болеют с выраженной клинической картиной (23,54,76).

В литературных источниках отмечают возможность регистрации как единичных случаев сальмонеллеза, так и массовых вспышек с охватом 4070% поголовья, причем последние более характерны для инфекции, вызванной S. gallinarum-pullorum. Гибель молодняка кур по разным данным составляет от 5 до 80%. У взрослых кур болезнь протекает, в основном, скрыто. Переболевшие птицы на протяжении многих месяцев, а, иногда, и пожизненно остаются бактерионосителями (11,13,17,19,20,26,36,38,55,60,76,78,93,121,140, 145,151,156).

2.1.3. Клинические признаки.

Сальмонеллезная инфекция у кур протекает остро, подостро или хронически, вызывая системные поражения в организме. Форма проявления и течение болезни зависят от пути заражения, дозы и вирулентности возбудителя, резистентности организма.

При остром течении сальмонеллёза у цыплят отмечают потерю аппетита, сонливость, малоподвижность, озноб, расстройство функции кишечника. Фекалии - водянистые, зеленоватого цвета с белыми прожилками. При поражении S. gallinarum-pullorum - диарейные массы, в основном, белого цвета. Пушок вокруг клоаки склеивается и может затруднять выход испражнений, накопление фекальных масс в клоаке, вызывая тем самым быструю гибель птицы от токсикоза (19,55,76,156).

Однако диарея - не обязательный симптом. Болезнь также характеризуется дрожью, иногда серозно-слизистым и слизисто-гнойным конъюнктивитом и ринитом, развитием синдрома пневмонии: цыплята широко расправляют крылья, перед гибелью ложатся на грудь, отмечается интенсивная одышка, взъерошенность или курчавость пушка. Пик смертности приходится в среднем на вторые - четвертые сутки с момента появления первых признаков болезни (19,36,38,58,76,96).

При подостром течении сальмонеллеза характерны неравномерное развитие молодняка, расстройство кишечника, хрипы и затруднённое дыхание, воспаление лёгких (19,76). Некоторые авторы отмечают также развитие при сальмонеллезе кур парезов и параличей ног и крыльев, а у птиц старших возрастных групп в ряде случаев - асцит (5,81).

У цыплят, выведенных из инфицированных яиц, клинические признаки болезни проявляются вскоре после вывода, а у заразившихся алиментарным и аэрогенным путями - спустя 3-5 дней (17,55). Гибель цыплят от сальмонеллеза энтеритидис своего пика достигает в возрасте 9-20 дней. В этом возрасте цыплята переболевают наиболее тяжело, болезнь имеет острое течение, летальность достигает 70% (76).

Механизм развития пуллороза тесно связан с нарушением общего адаптационного синдрома, что способствует диссеминации бактерий из первичного очага. Переход адаптивной реакции в патологию характеризует цитолиз клеток коркового вещества надпочечников и истощение (тотальную делим- фотизацию) тимуса и фабрициевой сумки (80).

Если птица не погибает на острой или подострой стадии переболевания, то болезнь принимает хроническое течение. У больных цыплят развивается истощение, отставание в росте и развитии, слабость конечностей. Заболевший молодняк сонлив, сидит в затемненных местах с втянутой головой и опущенными крыльями. Периодически возникают расстройства пищеварения, одышка (17,43,84).

По данным В.А. Радченко (1993 г.) при заражении 8. еЩегШШэ у молодых кур-несушек заболевание проявляется на пике яйценоскости в форме желточного перитонита (76). У взрослой птицы обнаруживают перигепатиты, оварииты, перитониты (5,19,76,81).

D.H. Erbeck, B.G. Mc Laughlin, S.N. Singh (1993 г.) наблюдали пуллороз кур с необычными признаками в двух близлежащих местностях на западе Кентуки США. В первом случае болезнь проявлялась внезапной гибелью большинства взрослых красных кур в возрасте от 5 месяцев до 2 лет. Исследователи, кроме S. pullorum, выявляли еще Е. coli из пораженных воздухоносных мешков. Другой случай характеризовался хроническим течением болезни с развитием истощения у взрослых кур породы плимутрок. Неподвижные пуллорные сальмонеллы были выделены в чистой культуре из сердца, яичников, костного мозга болевшей птицы (115).

Сальмонеллёз у кур протекает чаще в виде моноинфекции, реже - в ассоциации с эшерихиозом, пастереллёзом, орнитозом, аспергиллёзом, эйме- риозом и другими болезнями, что необходимо учитывать при диагностике (17,19,38,43,84,115).

2.1.4. Патологоанатомические изменения.

Гибель эмбрионов может произойти на любом этапе эмбрионального развития, но чаще с 7 по 20 дни инкубации. Основные патологические изменения у эмбрионов - отёчность аллантоисной оболочки, очаги некроза и массовые геморрагии во внутренних органах и на желточном мешке, скопление уратов. Печень увеличена в объёме, неравномерно окрашена. Желток густой, нерассосавшийся, зеленоватого цвета (17,76). В миокарде видны мелкие нек- робиотические очаги сероватого цвета (19).

У павших цыплят устанавливают характерные изменения кишечника. В просвете тонкой кишки - скопления слизи и газов. Слизистая оболочка - набухшая, гиперемированная, в отдельных участках отмечают мелкие кровоизлияния. В толстом отделе кишечника слизистая покрыта отрубевидным налётом, местами в ней находят петехии и эрозии (5,19,37,70,76).

При пуллорозе-тифе кур характерно скопление белых масс творожистой консистенции в илеоцекальном соединении кишечника, ампулообразное расширение прямой кишки, увеличение желчного пузыря, иногда с обесцвечиванием желчи (55,81). Часто у цыплят обнаруживают не рассосавшиеся желтки густой тягучей консистенции зеленоватого цвета (43,58,96).

Селезенка увеличена, набухшая, на разрезе можно установить повышенное кровенаполнение пульпы. Печень коричневато-бурого цвета, с зеленоватым оттенком. Под капсулой и в толще паренхимы нередко обнаруживаются мелкие очажки некроза светло-сероватого цвета с желтым оттенком, особенно при поражении 8. а11ташш-ри11огиш (5,19,55,81). Аналогичные некротические узелки отмечают в сердечной мышце и легких (58). Donghong, Э. Вохюп (1992 г.) отмечали отложение амилоида в печени цыплят, экспериментально зараженных 8. аШпашш-ри11огит (114).

Слизистая желчного пузыря набухшая, гиперемированная. При сальмонелл ёзе, вызванном 8. ег^егШсИБ желчный пузырь заполнен желчью темно- оливкого цвета с примесью фибрина и слизи (44).

При подостром и хроническом течении болезни поражается преимущественно толстый отдел кишечника, особенно отростки слепой кишки, где находят некроз слизистой с наложениями на её поверхности фибрина. В паренхиматозных органах изменения аналогичны описанным при остром течении, но выражены сильнее (5,19,81).

В грудной полости при сальмонеллезе у цыплят обнаруживают серозный выпот с примесью хлопьев фибрина. В легких - очаги уплотнения серо- красного цвета. Сердце несколько увеличено в объёме за счет расширения правого желудочка. Большинство авторов указывает на дряблость миокарда, кровенаполненность коронарных сосудов (5,44,81). При пуллорозе-тифе кур устанавливают также отёк и кровоизлияния в желточном мешке (5,19,55).

У взрослых кур обострение сальмонеллоносительства приводит к деструктивным изменениям яичных фолликулов и печени, появлению некрозо- язвенных участков и кровоизлияний на слизистой кишечника (58,80,156). Возможна, по данным Б.Ф. Бессарабова и соавт. (1983 г.), атрофия скелетной мускулатуры (17).

При гистологическом исследовании у кур отмечают изменения в тонком отделе кишечника, характерные для острого серозного или серозно- слизистого катара с участками десквамации эпителия, ворсинок и желёз. В толстом отделе - катарально-фибринозное, реже дифтеритическое воспаление с развитием некроза покровного эпителия и, частично, поверхностного слоя слизистой оболочки и ее отслоение, в результате чего в таких участках обнаруживают эрозии (5,80).

В селезёнке отмечают гиперплазию лимфоидных фолликулов белой пульпы, в почках - зернистую дистрофию эпителия извитых канальцев. В печени на фоне дистрофических изменений выражены: очаговый коагуляци- онный некроз гепатоцитов, расширение желчных капилляров и заполнение их желчью, сильная капиллярная и венозная гиперемия с множеством мелких кровоизлияний между балками, диапедез элементов крови через стенки набухших сосудов. Слизистая желчного пузыря - в состоянии катарально- фибринозного воспаления (5).

Морфологические изменения в тимусе исследователи характеризовали расширением мозговой и сужением корковой зоны, появлением телец Гасса- ля, в лёгких - картиной очаговой катаральной пневмонии, в миокарде - дистрофией и очагами коагуляционного некроза (17,81). Г.С. Качмазов и В.А. Радченко (1990 г.) при сальмонеллёзе, вызываемом 8. егйегШсИз, отмечали также серозный или серозно-фибринозный эпикардит и перикардит в стадии организации с очаговым разрастанием соединительной ткани (44).

При возникновении сальмонеллеза в хозяйстве проводят комплекс про- тивоэпизоотических и ветеринарно-санитарных мероприятий, уделяя особое внимание изоляции и дезифекции. В борьбе с инфекцией руководствуются ветеринарными правилами ВП 13.4.1318-96 «Профилактика и борьба с заразными болезнями, общими для человека и животных» (75), «Инструкцией о мероприятиях по профилактике и ликвидации заболевания кур и индеек пул- лорозом-тифом» от 13.03.85 №115-6а Главного управления ветеринарии Министерства сельского хозяйства СССР (42), инструкциями Ветеринарного законодательства.

Принятая система мер борьбы и профилактики сальмонеллеза кур, в первую очередь, предусматривает широкое применение различных антимикробных средств и пробиотиков (15,16,17,19,33,36,38,43,49,54,58,63,66,84).

Принцип профилактики сальмонеллезной инфекции с помощью пробиотиков основан на опережающем заселении желудочно-кишечного тракта нормальной микрофлорой: молочнокислыми, бифидо-, пропионовокислыми и т.п. бактериями, стрептококками, препятствующими росту и размножению патогенной и условно-патогенной микрофлоры. На сегодняшний день про- биотикотерапия является обязательным условием поддержания нормального биоценоза кишечника птицы, находящейся в замкнутом пространстве перенасыщенных популяций птицекомплексов. Однако, в связи с возможностью аэрогенной и трансовариальной передачи возбудителя применение только пробиотиков для профилактики сальмонеллеза кур не может являться высокоэффективным.

Одним из основных способов профилактики и лечения сальмонеллеза кур на сегодняшний день остается применение препаратов с антимикробным действием: антибиотиков, сульфаниламидов, нитрофуранов и других химио- терапевтических средств. Использование этих веществ значительно увеличивает себестоимость конечных продуктов, вводит ограничения на убой, требует больших затрат времени при индивидуальной обработке и больших затрат используемых препаратов при групповом оральном или аэрозольном применении. Последнее, к тому же, отрицательно сказывается на здоровье персонала и загрязняет окружающую среду. При применении на ферме антимикробных препаратов у циркулирующих микроорганизмов развивается устойчивость по отношению к ним, что зачастую делает дорогие новые препараты бесполезными для использования. В литературе часто отмечают случаи выделения полирезистентных изолятов сальмонелл, устойчивых одновременно к нескольким антибиотикам (20,22,23,33,37,51,54,58,60,76,84,105,121,151).

Применение пробиотиков и антибактериальных средств не ликвидирует сальмонеллоносительства, таким образом, не ликвидирует инфекцию. В связи с этим в промышленных птицеводческих хозяйствах желаемого эффекта в борьбе с сальмонеллезом кур нельзя достигнуть без применения эффективных средств иммунопрофилактики, о чем и было сказано в коммюнике экспертов комитета ВОЗ по проблеме сальмонеллеза (24,60,121,151).

2.2. Специфическая профилактика сальмонеллеза

Разработка средств специфической профилактики сальмонеллеза кур проводится с начала 50-х годов. Вакцины, предложенные различными авторами, можно разделить на 3 основных типа: инактивированные, живые, химические.

Инактивированные вакцины против сальмонеллеза кур были предложены в Великобритании, Индии, Франции, Италии, Израиле, Германии, Турции, России. Это, как правило, клетки сальмонелл, инактивированные формальдегидом или тиомерсалом, сорбированные на геле гидроокиси алюминия, алюмокалиевых квасцов, полиэтиленгликоле, эмульсии минеральных масел или другом депонирующем веществе. Существенным недостатком инактивированных вакцин является необходимость внутримышечного введения для создания активного иммунитета, что весьма трудоемко и возможно только взрослой птице. Многие исследователи, испытавшие эти препараты, указывают на недостаточную стимуляцию систем, ответственных за проявление клеточного иммунитета, имеющего ведущее значение при сальмонел- лезе, что делает такие вакцины слабоиммуногенными (60,92,102,110,150).

В нашей стране предложена инактивированная формолвакцина для кур, приготовленная из 8. егйегШсИз на кафедре микробиологии и вирусологии

Санкт-Петербургской ветеринарной академии (СПГАВМ). В отличие от других инактивированных вакцин данная применяется аэрозольно. Двукратная вакцинация родительского стада способствует формированию иммунитета у кур сроком до трех месяцев, увеличивает сохранность молодняка на 2,5-3%, повышает деловой выход молодки на 4,7% (76).

Первая живая вакцина против пуллороза (сальмонеллез, вызываемый S. gallinarum-pullorum) разработана в Великобритании Gordon и соавт. из штамма 9R в 1959 году. Из-за высокой остаточной вирулентности вакцинного штамма она не нашла широкого практического применения (92,110).

В связи с эпидемиологической значимостью сальмонеллезов кур в современный период интенсивная разработка живых вакцин начата многими исследователями. В последнее десятилетие были предложены: вакцина на основе метаболического мутанта S. typhimurium фирмы TAD F ARMA (Германия), вакцина из aroA S. enteritidis мутанта (Великобритания), две живых вакцины из спектомицинзависимых мутантов S. enteritidis и S. typhimurium (Великобритания), вакцины на основе ауксотрофных мутантов сальмонелл (Германия), вакцины, основанные на штаммах с инсерционной вставкой транспозона Т10, приводящей к нарушению подвижности и фимбриообразо- вания клеток сальмонелл (Lee et. al., 1996 г.) (109,120,143). Живые вакцины против сальмонеллеза кур разрабатываются также в Японии (Nakamura V.l. et. al., 1994 г.), Канаде (Tan et. al., 1997 г.), Италии (Pascuccis I. et. al., 1995 г.) и других странах мира (102,144).

Несколькими группами исследователей в Турции (Sayim Y., 1993 г.), США (Nagaraja K.V., 1994 г.), Великобритании (Georg., 1989 г.) создаются химические вакцины на основе компонентов клеточной стенки сальмонелл (119,141). В США разрабатывается идиотипическая вакцина на основе иммунных лимфокинов (Ziprin R.L. et. al., 1997 г.) (120).

Бивалентная живая вакцина рекомбинантная сальмонеллезная для птиц из штамма S. typhimurium №274/09 предложена ВНИИ эпидемиологии и микробиологии им. Н.Ф. Гамалеи, СПНИЭиМ им. Пастера и СПГАВМ на основе вакцины против сальмонеллеза овец. В результате гибридизации ат- тенуированных штаммов 8. с1иЬ1т и Б. 1урЫтипит на последний был передан соматический антиген 09, и получен рекомбинантный штамм для принципиально новой вакцины. Изучена защитная активность вакцины в отношении сальмонелл серогрупп В и Б. Пероральное применение этой вакцины позволяет снизить гибель цыплят, выведенных из яиц от вакцинированных кур родительского стада, за 90 дней их выращивания на 25,1%. Куры-несушки формируют иммунитет при пике напряженности на 8 сутки после третьей вакцинации (54).

Однако применением перечисленных вакцинных препаратов не решены проблемы защиты иммунотолерантных новорожденных цыплят, бактерионосительства при сальмонеллезе, безвредности применения. Потому немаловажное значение в специфической профилактике сальмонеллеза кур принадлежит специфичным, безвредным и высокоактивным бактериофагам. Такие бактериофаги лизируют эпизоотические штаммы сальмонелл, к которым они специфичны, применение фагов снимает бактерионосительство, не имеет противопоказаний (22,60).

2.3. Природа бактериофагов и их использование при бактериальных инфекциях птиц.

Бактериофагами называют живые мельчайшие вирусоподобные частицы, способные изменять биологические свойства бактерий, в т.ч. такие как наследственность и изменчивость. Честь открытия этого природного феномена разделили английский бактериолог Т\уог1;, описавший в 1915 году острую инфекционную болезнь стафилококков и возможность пассирования проходившего через бактериальные фильтры инфекционного агента, и канадский ученый, работавший в институте Пастера в Париже, Г. ё"НегПе, независимо от Т\^от1 описавший в 1917 году лизис дизентерийных бактерий мельчайшим агентом. Р. сГНегПе присвоил название открытому агенту «бактериофаг», описал основные биологические свойства фагов и разработал точный метод их титрования. Автор показал, что:

бактериофаг лучше лизирует молодые культуры, чем старые,

бактериофаг может лизировать бактерии в любой питательной среде и при этом он размножается за счет самих бактерий,

бактериофаг может вызвать лизис взвеси бактерий определенной густоты (от 50 до 500 млн. клеток), а в очень густых взвесях происходит частичный лизис или он совсем тормозится,

образующиеся на агаровых газонах бактерий пятна представляют собой невидимые скопления колоний бактериофага, и взятый с такого участка агар при внесении в бульонную культуру бактерий вызывает ее просветление вследствие лизиса,

на процесс лизиса отрицательно влияют все химические вещества и кислая реакция среды, которые вредны для бактерий,

могут встречаться устойчивые особи бактерии к лизису под влиянием бактериофага, способные беспрепятственно размножаться и давать вторичный рост культуры в бульоне или на агаре,

бактериофаг обладает определенной степенью вирулентности, которая при пассаже на высокочувствительных культурах усиливается (2).

2.3.1. Морфология и структура бактериофагов, их классификации.

Б. (1"НегИе установил корпускулярную природу бактериофагов, определил 4 фазы взаимодействия фага с бактерией: 1 - адсорбция фага на поверхности бактериальной клетки, 2 - проникновение фага в бакклетку, 3 - размножение в бактериальной клетке фагового белка, 4 - лизис бакклетки и освобождение зрелых фаговых частиц, готовых начать новый жизненный цикл (2,122).

Идеи Б. сГНегНе о типовой взаимосвязи фага с микробной клеткой заинтересовали многих ученых. В период с 1920 по 1940 гг. было проведено большое количество работ, посвященных изучению возможности применения бактериофагов с терапевтической целью. В большинстве случаев результаты оказались сомнительными, но при некоторых заболеваниях, например при холере, удалось получить терапевтический эффект. С открытием химио- терапевтических препаратов интерес к применению фагов значительно снизился, но первоначальные надежды на эффективность применения фага в медицине послужили стимулом для проведения многих ценных работ, касающихся специфичности, иммуногенности, стабильности, изменчивости и других свойств бактериофагов.

Выделенные фаги могут быть охарактеризованы по морфологии вирио- нов и негативных колоний, антигенным свойствам, спектру литического действия, чувствительности к воздействию химических веществ и физических факторов, а также по характеристикам взаимодействия в системе «фаг - бактериальная клетка» (2,21,34).

Антигенные свойства приняты в качестве основного критерия дифференциации сальмонеллезных бактериофагов (29). Однако, по данным некоторых авторов, антигенные свойства фагов не связаны с их спектром литического действия, который определяется прежде всего спецификой адсорбционных структур конкретного типа бактериофага (34,77,85).

Современная классификация фагов основана на их химической структуре - типе нуклеиновой кислоты, заключенной в белковой оболочке фага. Различают ДНК- и РНК-содержащие бактериофаги (122,130,136,161).

Вторым классификационным признаком фагов является их тип взаимодействия с микробной клеткой. Согласно этому критерию фаги делятся на вирулентные и умеренные. Заражение бактерий вирулентным фагом завершается лизисом и гибелью клетки (95,131,163).

Первые данные о строении фагов приведены в 1941 году в работе Н. Rusca, который провел электронно-микроскопические исследования дизентерийных фагов (34). Детальные микроскопические исследования в сочетании с некоторыми физико-химическими методами изучения фагов показали, что каждый фаг состоит из различных морфологических элементов, специально приспособленных для защиты ДНК или РНК фага и его внедрения в микробную клетку-мишень. Основные части булавовидных фагов называют головкой и отростком (или хвостом). Головка имеет белковую оболочку - капсид. Морфологические субъединицы капсида, различаемые в электронном микроскопе, называют капсомерами. Структурные элементы сложно устроенных фагов называют наружным чехлом, или чехлом, и внутренним стержнем, или стержнем. Концевая структура отростка фага - базальная пластинка имеет, как правило, отходящие тонкие нити. Если головки и капсиды у многих фагов по своему строению довольно сходны и обычно представляют собой многогранники (октаэдры или икосаэдры) правильной или удлиненной формы размерами от 20 до 150 нм, то в строении отростков имеются существенные различия. На основании этих различий предложен ряд морфологических классификаций фагов. Bradley (1960 г.) разграничивает фаги с сокращающимся чехлом отростка (А), фаги с длинным отростком без сокращающегося чехла (В), фаги с коротким отростком (С), фаги с крупными капсомерами и аналогом отростка (D), фаги с мелкими капсомерами и без отростка (Е), фаги нитевидной формы (F).

A.C. Тихоненко (1968 г.) предложил разделить фаги в порядке усложнения их структуры на пять основных групп (88). С эволюционной точки зрения эта классификация наиболее оправдана.

К первой группе отнесены нитевидные фаги (подобные вирусу табачной мозаики фаги fd, fl, М13 и др.) длиной 700-850 нм и шириной 4-8 нм. Эти фаги состоят из трубкообразного капсида, в котором заключена особая однотяжевая ДНК, составляющая 11,5-14% вириона.

Во второй группе объединены мелкие сферические фаги с формой икосаэдра около 20-30 нм в диаметре, содержащие также однотяжевую ДНК (S13, fZ, fr, R17, М12).

К третьей группе относятся фаги, обладающие четко выраженным хвостовым отростком небольшого размера. Эти фаги найдены у различных родов спорообразующих бактерий, у актиномицетов, хореллы и др. В их головках (40-65 нм) заключена обычная двутяжевая ДНК. По строению отростка выделяют две подгруппы этих фагов: с коротким конусовидным отростком без базальной пластинки (ТЗ, Т4, бруцеллофаги) и с коротким отростком, имеющим базальную пластинку (фаг Р22 к S. typhimurium).

Четвертую группу составляют наиболее распространенные булавовидные фаги (Tl, Т5, фаг к В. anthracis, А, и мн. др.) с длинным несокращающим- ся отростком и изометрическими головками размером от 50 до 100 нм, содержащими внутри обычную двутяжевую ДНК. Концевые структуры отростков фагов четвертой группы весьма разнообразны: в виде базальной пластинки с пятью или шестью лопастями, в виде различной длины выростов, в виде гладкого или конусовидно суженного конца с наличием одной или нескольких нитей. В эту группу входит большинство известных сальмонеллезных фагов (62).

В пятую группу по A.C. Тихоненко отнесены ДНК-содержащие бактериофаги булавовидной формы, имеющие мощный отросток сложного строения, который состоит из наружного сокращающегося чехла, внутреннего жесткого полого стержня и хорошо выраженной базальной пластинки. Последняя, в свою очередь, имеет ряд элементов типа выростов с шипами и почти у всех фагов снабжена длинными нитями. При сокращении чехол отростка расширяется и укорачивается, обнажая дистальный конец внутреннего стержня, который может проникать через клеточную стенку бактерий. К этой группе относится наиболее изученный фаг Т2 и другие Т-четные фаги (88).

2.3.2. Фазы «фаговой инфекции».

Деление фагов на вирулентные и умеренные достаточно условно. Установлено, что в зависимости от конкретной системы «фаг-хозяин» один и тот же штамм в одном случае развивается по литическому циклу, а в другом - ведет себя как типичный умеренный фаг, вызывая с различной частотой ли- зогенизацию клеток (2,34,107).

Литическое действие бактериофагов осуществляется путем инфициров- ния чувствительных бактериальных клеток зрелыми фаговыми частицами. Этот процесс получил название «фаговой инфекции». Он протекает циклически. При внутриклеточном (латентном) развитии вирулентного фага стадии разделены на:

морфологическое изменение ядерного аппарата инфицированной бактерии после адсорбции,

репродукцию ДНК и белка фага в зараженных бактериях,

лизис зараженных бактерий (8).

Первичная фаза взаимодействия бактериофага с бактерией, адсорбция, состоит из диффузии фаговых частиц в среде, их случайном столкновении с бактериями и специфическом прикреплении к поверхности бактериальной клетки (2).

На ход этого процесса влияют количественные соотношения между фагом и клеткой, физические и химические факторы среды, фагоустойчивость бактерий. Феномен бактериофагии протекает в нейтральной или слабо щелочной среде (pH 7,4-7,6). Многие исследователи отмечают, что бактериофаги не адсорбируются на чувствительных бактериальных клетках при pH ниже 5 или выше 12 (95,97,158,160,161).

М. Delbrck (1936 г.) определил адсорбцию фага как процесс его диффузии в среде и специфического закрепления. Именно от адсорбции во многом зависят биологические свойства бактериофага, определяемые трансдукцией и лизогенной конверсией. Было показано, что последняя не только конвертирует авирулентные штаммы дифтерийных бактерий в токсигенные, но также меняет и другие признаки. Так, например, профаг внедряется в генетический аппарат бактерии под влиянием носимого ею латентного фага (112,122). Но, по мнению L. Tolmach (1957 г.), адсорбция отражает лишь физико- химический механизм, и поэтому автор предложил термины «закрепление» и «связывание» (158).

Фаг фиксируется и прикрепляется к бактериальной клетке в зависимости от своей природы, антигенной структуры самой клетки, их фаз роста и размножения. Для взаимодействия с рецепторами клеточной поверхности необходимо изменение конформации фибрилл (103).

Адсорбция фага состоит из обратимой и необратимой фаз. При необратимой ферментативной фазе наблюдается закрепление фага, который не отделяется от клетки, не нейтрализуется антифаговой сывороткой. При этом его эффективность зависит от температуры, вязкости среды и других факторов (131,148,161).

Адсорбцию фага на клетке могут стимулировать катионы и органические вещества. По данным Т. Anderson, Р. Fildes, D. Kay (1957 г.), триптофан играет большую роль в адсорбции фага Е4 Е. coli, что связано с действием аминокислот на фаг (118,133,160). Индол, скатол и другие антагонисты триптофана, по данным М. Debruck (1940 г.), могут тормозить взаимодействие бактерии с фагом (111). Электростатический механизм первичного взаимодействия фага на бактерии можно моделировать на поверхности ионообмен- ника. Например, фаг Т4 прикрепляется к поверхности ионообменника только в присутствии триптофана. При начальном действии фага с катионом наблюдается выделение ДНК фага так же, как это происходит при его закреплении на поверхности клетки. Эти физико-химические представления указывают на одно из основных свойств фага - его специфичность (47,117).

По мнению L. Zelkowiz, Н. Noli (1959 г.), при прикреплении фага на бактерии большое значение имеют водорастворимые липиды клетки (163).

Бактериальная клетка несет на своей поверхности значительное количество рецепторных участков для адсорбции фагов. Возникновение фагоустой- чивых мутантов в большинстве случаев сопровождается потерей рецепторных участков фага клеточной стенкой, в результате чего бактериофаг теряет способность адсорбироваться (89).

Потеря фагорецепторов, как правило, связана с обширными изменениями клеточной поверхности, где локализованы многие структуры, детерминирующие патогенность бактерий. Вследствие этого, образующиеся фагоустой- чивые мутанты адсорбционного типа, в т.ч. и выделяемые после проведения фаготерапии, часто имеют пониженную вирулентность по сравнению с исходной структурой (65,74,155).

Другой причиной образования фагоустойчивых форм бактерий является наличие у них систем рестикции и модификации фаговых нуклеиновых кислот.

Наиболее изучено влияние систем хозяйской специфичности на фаговую инфекцию. Фаговая ДНК, инъецированная в клетку, подвергается воздействию специфических нуклеаз - рестрикции, в этом проявляется защитный механизм клетки от внедрения чужеродного генетического материала (67,89).

Немодифицированный вирус способен инфицировать лишь немногие клетки бактериальной популяции. Фактически, инфицируются клетки с ослабленной или выключенной системой рестрикции, а также обычные клетки при высокой множественности заражения (1,87).

Потомство бактериофагов, избежавших рестрикции, подвергается модификации, приобретая фенотип хозяина, характерный для данной системы хозяйской специфичности. Фаговые частицы, вышедшие из таких клеток, способны размножаться на этом новом бактериальном хозяине. В этом заключается пассивный метод преодоления системы хозяйской специфичности ДНК - адаптация фагов (68).

В ходе эволюции бактериофагов при постоянно меняющихся взаимоотношениях в системах «фаг-хозяин» у них сформировался ряд адаптивных механизмов активного противодействия нуклеазам клеток. Для активного преодоления систем хозяйской специфичности бактериальных клеток у фагов обнаружено несколько механизмов вирусспецифической защиты: 1) разрушение донора метальных групп - кофактора рестриктаз; 2) белки-ингибиторы прямого ингибирования рестриктаз; 3) элиминация сайта узнавания рестриктаз в ходе эволюции; 4) защита этого сайта с помощью особых белков; 5) неспецифические механизмы защиты - введение аномальных оснований экстра-сахаров в фаговую ДНК (1,67,68,87,134).

Наличие вирусспецифических систем защиты, в конечном итоге, и определяет возможность эффективного использования препаратов бактериофагов в лечебных и профилактических целях (90).

Адсорбция сменяется второй фазой взаимодействия фага и бактерии, а именно проникновением его в последнюю. При необратимой фиксации фага на стенке бактерии происходит расщепление периферической части его хвоста на тонкие волокна, играющие роль связывания с субстратом. При этом освобождение дистальной части хвоста фага обусловлено разрывом эфирных связей между нитями и белковым стержнем (86,95,163).

Исследования Ю.С. Тараховского и соавт. (1994 г.) выявили механизмы транспорта фаговой ДНК при инфицировании грамотрицательных бактерий. Согласно их положениям после адсорбции фага на поверхности бактериальной клетки происходит прогиб внешней мембраны и образование непосредственного контакта между внешней и внутренней мембранами бактерии. Эта стадия возможна при окружающей температуре от 0 до 6С. При 6-7С начинается слияние мембран и образование широкого межмембранного мостика, появление утечек калия и проникновение фаговой ДНК в цитоплазму клетки- мишени. При температуре окружающей среды 20С и выше диаметр межмембранного мостика существенно уменьшается, наблюдается изменение зависимости начальной скорости утечек ионов калия от температуры.

Таким образом, слияние мембран и формирование межмембранного мостика, или поры, в клеточной оболочке вызывает высвобождение калия из цитоплазмы бактериальной клетки и дессипацию электрохимического потенциала на плазматической мембране. При инфицировании в физиологических условиях этот процесс занимает несколько минут. Затем, согласно гипотезе Ю.С. Тараховского и соавт., стержень фага гидрофобно взаимодействует с мембраной, в результате образуется специфическая структура - туннель. На последних стадиях инфицирования происходит закрытие межмембранного канала и восстановление электрохимического потенциала на плазматической мембране (86).

Под влиянием сократимого белка осевая часть хвоста фага проникает по образовавшемуся туннелю, и, вслед за этим, внутрь бактерии инъецируется содержимое головки. С этого момента, как отмечают Н. Wisconti и D. Frazer (1956 г.), начинается вегетативная фаза латентного периода развития фага (161). Второй этап латентного периода характеризуется формированием зрелых частиц фага. Когда их число достигает критической величины, происходит лизис клетки, и фаги выходят в среду (48,99,105,162).

L. Fowler и D. Cohen (1945 г.) показали, что бактерии Е. coli, выращенные в питательном бульоне и инфицированные гомологичными фагами, освобождают фаг через 20-22 минуты. При выращивании в той же среде, но с ресуспендированием в синтетической смеси, они давали потомство фага через 40-70 минут.

С появлением фаговой ДНК в клетке-хозяина отмечается ряд культу- ральных изменений. Так, при заражении фагами Е. coli в них увеличивается скорость синтеза ДНК, прекращается синтез собственных белков и начинается усиленное производство фагового белка и фаговой ДНК (131).

Последняя стадия инфекционного процесса, т.е. лизис микробной клетки, сопровождается выходом многочисленного фагового потомства.

Инфекционные циклы следуют друг за другом: популяция фага линейно возрастает в каждом цикле с коэффициентом, равным величине выхода фага при лизисе клетки, до тех пор, пока не наступит лизис всех чувствительных бактерий. Инфицирование одной бактериальной клетки двумя родственными фагами приводит к размножению обоих фагов, но два чужеродных фага в одной клетке существовать не могут - размножится тот фаг, который инъецировал свою ДНК первым. Специфическое взаимодействие вирулентного фага с бактерией, которое завершается лизисом бактериальной клетки с выходом новой популяции фага, дало возможность использованию бактериофагов как диагностических, лечебных и профилактических средств (128,129,145,153, 157).

Установлено также, что и микробы и бактериофаги размножаются по времени логарифмически. Причем скорость накопления бактериофага значительно опережает скорость размножения микроба. Темп накопления остается постоянным для данного бактериофага. Скорость размножения фагов будет неизменной, их концентрация будет увеличиваться с одинаковым постоянством при любых начальных его концентрациях. Конечная популяция фага в несколько раз выше максимальной численности популяции микробов (52,142).

Феномен бактериолизиса, обусловленного фагом, изучался на самых разнообразных моделях системы фаг+бактерия. Высокая литическая активность была получена в опытах с кишечной палочкой (153), на стафилококках и сальмонеллах (145). Доказано, что лизис бактерий возможен как в жидких, так и в твердых средах. L. Crugher, М. Delbrck (1940 г.) и др. показали, что при инфицировании фагом в соотношении около 200 фагов на бактериальную клетку последняя лизируется, но размножение фага не происходит. В таких случаях бактерии набухают, приобретают специфическую форму и постепенно исчезают под действием лизоцима фаговых отростков на клеточные стенки бактерии. Так происходит другой тип литической реакции бактериофагами клетки-мишени - «лизис извне» (34,111,113).

Вместе с тем имеются работы, свидетельствующие о том, что бактериальная взвесь не всегда растворяется при очень высоких соотношениях между фагом и бактерией. Наиболее выраженную литическую активность отмечали при равных и меньших соотношениях бактериофага и бактериальной клетки-мишени (40,108).

А. Brown (1956 г.) доказал ферментативную природу лизиса бактерий: литические ферменты фагов разнообразны - от подобных лизоциму до подобных гиалуронидазе. Литические ферменты фага обусловливают растворение клеточной стенки, что обеспечивает гибель бактериальной клетки. Такая способность фагов определяет большое практическое значение их в борьбе с возбудителями различных болезней.

Установлено, что наиболее выраженная активность фага по отношению к бактериальной клетке отмечается при температуре от 22 до 37С. При такой температуре уже за 60 минут количество живых бактерий кишечной палочки уменьшается на 91%, а через 90 минут - все погибают (108). Отдельные авторы подтверждали лизис бактериальных клеток под действием фагов при низких и высоких температурах, полное прекращение лизиса бактерий при температуре 70С. Низкие температуры снижают лизирующую активность фагов, но не прекращают их деятельность полностью (86,97,99,161).

2.3.3. Применение фагов при салыионеллезах.

Учитывая высокую лизирующую активность бактериофагов, многие исследователи применяли их для типирования возбудителей болезней в очагах сложной эпидемиологической ситуации, для лечения и профилактики инфекционных болезней, к возбудителям которых были получены эти фаги.

В медицинской и ветеринарной практике применяют фаги, выделенные от переболевших сальмонеллезом животных, а также из сточных вод хозяйств, неблагополучных по этой болезни.

Бактериофаги для лечения животных, в т.ч. птиц, а также для идентификации микроорганизмов, должны иметь титр не менее 10" 7 -10" 8 , и лизировать бактериальные культуры в течение 6-10 часов. Для производства бактериофагов обычно используют по несколько типов соответствующих микроорганизмов (сальмонеллезные фаги, применяемые в лечебных целях, состоят из шести типов) (28,66,71,97,117).

Ряд авторов описали случаи успешного применения бактериофагов для эпидемиологического обследования очагов брюшного тифа и выделения источников инфекции. Кроме того, исследователями указана возможность идентифицирования возбудителя брюшного гифа с помощью бактериофагов в очаге массового заболевания детей при наличии сальмонеллоносительства у нескольких человек среди обслуживающего персонала (3,56,83,117).

Метод фаготипирования для идентификации местных случаев заболевания людей сальмонеллезами от приезжих был предложен A. Foley, G. Pet- zold, С. Fowler и соавторами (117,118,147).

Лизис фагами сальмонелл был достаточно глубоко озвучен многими учеными прошлого столетия. A. Lylinghen и др. предложили схему типирования S. typhimurium, для чего использовали фаги, изолированные из фекалий, сточных вод, изогенных штаммов сальмонелл (4,28,35,64,97,98,108,111).

Наиболее широкое признание в диагностической практике получил метод Феликса (1955), основанный на использовании фагов, с помощью которых могут быть идентифицированы 13 фаготипов S. typhimurium (116). Применяются в лабораторной практике фаготипирования возбудителя болезни и другие сальмонеллезные фаги. Известно несколько схем фаготипирования для отдельных культур рода Salmonella (Ss. typhi, paratyphi, typhimurium, dublin, enteritidis, gallinarum-pullorum и других). Еще в 1929 году McDonald и Smitt установили методом фаготипирования эпидемиологическую связь спорадических сальмонеллезов и небольших семейных вспышек с сальмонелле- зами свиней, убитых на местной бойне (154). А.Г. Бочарова (1968 г.) использовала фаги для подтверждения паратифа у телят в различных хозяйствах Челябинской области, В.И. Ширяева и Н.М. Никитюк (1969 г.) изучали с помощью сальмонеллезных бактериофагов видовую принадлежность сальмонелл, выделенных от свиней, городских голубей и обезьян. Результаты исследований названные и другие авторы предлагали для изучения источников заражения людей сальмонеллезом (47,138).

Некоторые ученые предложили использовать сальмонеллезные бактериофаги не только для идентификации культур возбудителя, но и для ускорения постановки диагноза. В ветеринарной лабораторной практике фагои- дентификация давно предложена при паратифозном аборте у кобыл и при других сальмонеллезах. Материал от абортированного плода кобылы высевают на скошенный мясо-пептонный агар в пробирке, затем на нижнюю половину поверхности среды наносят каплю специфического фага и дают ей стечь. Пробирку помещают в термостат и на второй день учитывают результаты. Если в исходном материале имеется возбудитель S. abortus equi, то в верхней части поверхности среды будет наблюдаться рост микроба, а в нижней части по ходу стекания капли фага отмечается отсутствие роста (64,77,106).

Фагодиагностика нашла применение и при санитарно- эпидемиологических (эпизоотологических) исследованиях. Бактериофаги брюшно-тифозных сальмонелл, кишечной палочки и некоторых других бактерий могут обнаруживаться в воде рек, прудов, колодцев, родников, а также сточных вод. Установление наличия фага в воде (или почве) может служить показателем ее загрязнения соответствующими бактериями. Установление титра фага в воде позволяет определить степень загрязненности соответствующими микробами (64,149).

Впервые Б. сГНегПе применил фаги с лечебной целью при кишечных инфекциях, а затем использовал их при пуллорозе-тифе кур и пастереллезе буйволов с положительными результатами. Опыт ученого был продолжен многими исследователями, которые получали противоречивые результаты фагопрофилактики и фаготерапии разнообразных бактериальных инфекций. Однако следует отметить, что длительное время применялись малоизученные фаги, не всегда однородные и в надлежащей степени стабильные, с недостаточной вирулентностью или с недостаточно широким диапазоном литическо- го действия в отношении возбудителей, циркулирующих в определенной местности. К тому же поведение фага в живом организме оказалось недостаточно изученным, что послужило стимулом исследовательской работы в этом направлении. Определенную роль в этом сыграло широкое распространение форм бактерий, устойчивых к большому числу антибактериальных средств, наличие у бактерий трансмиссивных плазмид множественной лекарственной устойчивости, а также значительное количество осложнений, связанных с применением химиотерапевтических препаратов (22,27,30,77).

Было установлено, что фаги, введенные животным перорально, подкожно, внутримышечно, внутривенно и другими путями, - полностью безвредны (исключая редкие случаи шоковых явлений на белковые субстанции бульона), быстро распространяются во всем организме, но в крови не задерживаются, адсорбируясь в лимфатических узлах, печени, селезенке и других органах и тканях. В зависимости от вида животного, способа введения, дозы фаг исчезает из организма через 2-7 суток после введения, частично разрушаясь, частично выводясь через кишечник, почки, а также со слюной. Если же одновременно с фагом вводили и соответствующие бактерии, то фаг обнаруживался в организме через 12 и более дней (95).

Бактериофаги как биопрепараты представляют собой фильтраты полностью лизированной тем или иным фагом соответствующей бульонной культуры бактерии, расфасованные во флаконы или ампулы с обозначением вида фага, его титра, срока годности, учреждения, выпустившего препарат, способа применения.

В 40-х годах XX века бактерифаг, предложенный И.Ф. Квеситадзе, был применен для лечения свыше 6 тыс. больных сальмонеллезом телят. Наилучший результат он давал в начале заболевания - телята выздоравливали на 3-5 сутки. Эффективность фаготерапии паратифа (сальмонеллеза) телят достигала в некоторых хозяйствах 90-100%. Несколько ниже была эффективность фагопрофилактики паратифа у телят при выпойке фага через каждые 9 дней (45). Сходные результаты получил С.М. Муромцев, применивший бактериофаг при лечении сальмонеллеза телят и поросят в 1947 году. Он показал, что фаги, вызывая лизис бактерий, обеспечивают полную элиминацию возбудителя и профилактируют развитие бактерионосительства, в чем их несомненное преимущество перед вакцинами и сыворотками (65).

В последующем были разработаны и нашли применение гертнер-фаг при сальмонеллезе телят, суипестиферфаг - при сальмонеллезе поросят, а с середины столетия И.П. Бирюков, Р.К. Петренко и другие предложили пул- лорум-фаги с высокой литической активностью, что предохраняло цыплят от пуллороза на 90% в лабораторных условиях, на 80% - в производственных условиях. Периодическая дача фага цыплятам и несушкам способствовала снижению бактерионосительства у последних в 3-6 раз. По данным A.B. Ро- мина (1955 г.), пуллорум-фаг с титром Ю -10 , примененный на большом поголовье птиц, обеспечил сохранность 92-96%. У фагообработанных цыплят оказались лучше выраженными агглютинирующие свойства крови, что позволило более успешно выявлять по реакции крове-капельной агглютинации бактерионосителей (77,79). Пуллорный фаг с 1961 г. был взят на вооружение ветеринарии, но со временем эффективность его применения снизилась, все больше отмечалось хозяйств с фагоустойчивыми штаммами 8. аШпагит- риПогит.

С целью повышения эффективности фагопрепаратов предпринимаются попытки их усовершенствования путем постоянного пополнения новыми высокоактивными штаммами или расами фагов, выделяемыми из различных источников или адаптируемыми к свежевыделенным культурам возбудителей, которые циркулируют в данное время в определенной местности. Для этого рекомендуется отбирать штаммы фагов с выраженной адсорбционной способностью на клетках хозяина и сочетающие минимальные значения периода внутриклеточного развития с высокой урожайностью (72,74,90). По мнению В.А. Зуева (1969 г.), для производственного штамма фага желательна способность к индукции синтеза свободного фагового лизоцима, как дополнительного фактора литической активности (40). Г.П. Кикнадзе и Т.Г. Чани- швили (1972 г.) считают, что в качестве дополнительного критерия активности лечебно-профилактических бактериофагов необходимо использовать определение частоты образования фагоустойчивых форм, что позволяет объективно судить о стабильности литической реакции фагов (46).

Клоны бактериофагов могут резко различаться стабильностью лизиса и способностью репродуцироваться на фагоустойчивых мутантах бактерий. При наличии двух и более клонов, перекрестно лизирующих бактерии, частота фагоустойчивости значительно снижается (90). В связи с этим, введение в состав препарата фагов, обладающих взаимно перекрывающимся литиче- ским спектром, резко повышает лечебную эффективность бактериофага как биопрепарата (22,89).

В настоящее время для профилактики и лечения сальмонеллеза птиц предложены бактериофаг против пуллороза-тифа кур Алма-Атинским биокомбинатом; поливалентный сальмонеллезный бактериофаг АВСРЕ Нижегородского НИИЭиМ и бактериофаг сальмонеллезный жидкий СПНПФ «Биотех», заимствованные из гуманитарной медицины. Их применение перо- ральным или аэрозольным способом обеспечивает повышение сохранности цыплят, ремонтного молодняка, делового выхода молодки (28,44,54).

Как отмечалось ранее (п. 2.2.), обеспечить защиту цыплят первых дней жизни, освободить переболевших и маточное поголовье от сальмонеллоноси- тельства призваны активные специфические бактериофаги, профилактиро- вать в дальнейшем заражение возможно использованием вакцин. Это подтолкнуло ученых к созданию нового препарата. В 1995 году научными сотрудниками Всероссийского государственного научно-исследовательского института контроля, стандартизации и сертификации ветеринарных препаратов был предложен новый класс биологических препаратов - сальмофаги. Комплексный препарат - сальмофаг энтеритидис включает в своем составе вакцинный генетически маркированный, фагоустойчивый штамм 8. еп1егШсИ8 и специфический бактериофаг к эпизоотическим штаммам данного серовара сальмонелл. Сочетанное действие бактериофага и вакцинного штамма позволяет обеспечить и лечебный и профилактический эффект, что было изучено на лабораторных животных - белых мышах, а также цыплятах (60,61).

Штамм для изготовления фагового компонента представляет собой высокоактивный бактериофаг широкого спектра действия, лизирующий эпизоотические штаммы 8. ег^егШ&Б, выделенные в различных регионах Российской Федерации.

Одновременное введение фагоустойчивого вакцинного штамма и бактериофага, лизирующего эпизоотический штамм, исключает поствакцинальные осложнения и снимает проблему инфекции, обычно имеющую место при вакцинации по инфицированному фону (59).

Аттенуированный штамм, используемый в сальмофаге в качестве вакцинного компонента, получен путем инсерционного мутагенеза - внедрением в геном рифампицина - резистентного мутанта высоковирулентного эпизоотического штамма транспозонов Тп 7 и Тп 10, с последующей селекцией клонов, устойчивых к действию фага (61).

В дальнейшем сотрудниками ВГНКИ был разработан сальмофаг пул- лорум, объединивший в себе аттенуированный штамм 8. а11ташш-ри11ошт Т 10 и бактериофаги, высокоактивные против эпизоотических штаммов сальмонелл, вызывающих пуллороз-тиф кур и др. птиц, при этом не действующие на вакцинный штамм. Согласно литературным данным, исследовательские работы по изучению лечебных и протективных свойств сальмофага пуллорум в остром лабораторном опыте на восприимчивых объектах (цыплятах), а также производственное испытание препарата до настоящего времени не проводились.

Бивалентный сальмофаг против сальмонеллеза энтеритидис и пуллоро- за-тифа кур объединил в себе сальмофаг энтеритидис и сальмофаг пуллорум и призван обеспечить защиту цыплят от основных этиопатогенных возбудителей сальмонеллеза. Изучению защитных свойств препарата бивалентный сальмофаг и посвящена настоящая работа.

Этиологические особенности сальмонеллеза кур

Возбудитель болезни - бактерии из рода Salmonella семейства Entero- bacteriaceae. Впервые данную бактерию выделили из органов свиней американские ветеринарные врачи Salmon и Smitt в 1885 году и назвали микроб Bact. suipestifer. В 1888 г. Gartner при выяснении этиологии отравлений людей обнаружил один и тот же микроб этого рода в мясе коровы и селезенке умершего человека, и тем самым впервые обосновал бактериальную этиологию сальмонеллезных вспышек. Бактерию назвали Bact. enteritidis (93). В 1890 г. Laffler выделил от павших мышей микроб, получивший название Bact. typhimurium. В том же году Schottmuller и одновременно с ним Kurth во время массовой вспышки заболеваний, клинически сходных с брюшным тифом, выделили Bact. paratyphi и указали на идентичность палочки Гетнера с другими возбудителями пищевых токсикоинфекций. Поэтому все подобные бактерии объединили в одну группу «паратифозных» (91,93).

Международная номенклатурная комиссия в 1934 году отнесла все эти бактерии в род Salmonella. С появлением и открытием новых сальмонелл предлагались различные классификации их с учетом культуральных, ферментативных и серологических свойств. Уже тогда многими исследователями была установлена клинико-эпидемиологическая связь между возбудителями типичного паратифозного заболевания у человека (паратиф А и В) и возбудителями сальмонеллезных токсикоинфекций (93).

На сегодняшний день насчитывается более 2500 сероваров сальмонелл, которые разделены по антигенному родству на 52 серологические группы. В пределах каждого серовара сальмонеллы подразделяются на биовары, фаго- вары, кроме того, они различаются по характеру продуцируемого бактерио- цина (53,57,82,121,135,139,151).

Согласно последней номенклатуре Всемирной организации здравоохранения (1990 г.) род Salmonella состоит только из двух видов: S. enterica и S. bongori. S. enterica делится на 6 подвидов:

I - подвид enterica (choleraesuis);

II - подвид salamae;

III - подвид arizonae Illa и Illd;

IV - подвид diarizonae;

V - подвид houtenae;

VI - подвид indica (135).

Возбудители сальмонеллеза кур относятся преимущественно к подвиду enterica. Это прямые, с закругленными концами грамотрицательные палочки длиной 2-5 мкм и шириной 0,7-1,5 мкм, не кислотоустойчивые и не формирующие эндоспор и микроцист. За счет перитрихиальных жгутиков обычно подвижны, за исключением S. gallinarum-pullorum. Сальмонеллы обладают как дыхательным, так и ферментативным типами метаболизма, что их отличает от других бактерий семейства Enterobacteriacea. Важное дифференциальное значение для рода Salmonella имеют отрицательные тесты на индоло- образование, утилизацию цитрата и малоната натрия, дезаминирование фе- нилаланина, положительный тест на декарбоксилирование лизина (57,82).

В процессе роста энтеробактерии рода Salmonella не ферментируют лактозу, сахарозу, инозит, салицин, не гидролизируют мочевину и желатин, образуют сероводород, редуцируют нитраты, ферментируют маннит. Однако ферментативная активность у сальмонелл может варьировать, что послужило поводом подразделить их на подроды. Отмечено также, что культуры в R- и S-форме могут иметь различия биохимических и серологических свойств (82).

Рост культуры рода Salmonella на МПА образует прозрачные с голубоватым оттенком колонии диаметром от 2 до 5 мм. На агаре Эндо колонии сальмонелл прозрачные, бледно-розовые, на среде Левина - прозрачные с фиолетовым блеском, на агаре Плоскирева - бесцветные, непрозрачные, на висмут-сульфит агаре - черные с металлическим блеском, аналогичные черные колонии с желтоватым ободком и на сальмонеллезно-шигеллезном агаре (53,57,82).

В качестве сред накопления используют селенитовую, магниевую, среды Кауфмана, Мюллера, Киллиана. По данным ВОЗ наиболее эффективной селективной средой изоляции и обогащения сальмонелл является среда Раппо- порта-Вассилиади (151).

Сальмонеллы - аэробы и факультативные анаэробы, оптимальная температура для роста 36-37 С, pH среды 7,0-7,2 (17,38,53,57,70,82).

Антигенная структура сальмонелл, на основании которой в 1940 году предложена их классификация (Кауфман и Уайг), представлена соматическим, жгутиковым антигенами, а также Vi- и поверхностными К-антигенами.

О-антиген (соматический) - термостабильный липосахаридно-белковый комплекс. Жгутиковые Н-антигены - термолабильны, состоят из белка и делятся на 2 вида: первой фазы, обладающие специфическими свойствами, и второй фазы - неспецифическими, характерными для различных сероваров сальмонелл (8,17,53,57,82,104,139).

Для полной идентификации сальмонелл необходима их серологическая типизация по О- и Н-антигенам в реакции агглютинации с поливалентными групповыми О-сыворотками и с монорецепторными О- и Н-сыворотками.

В серогруппе А (02) представлена S. paratyphi А, в серогруппе В (04) - Ss. paratyphi В, typhimurium, abortus equi, abortus ovis, heidelberg, Stanley и другие; в серогруппе С Ss. cholerae suis, paratypti С, typhisuis, thompson, в серогруппе D - Ss. typhi, enteritidis, dublin, gallinarum-pullorum, moskow, panama и другие; в серогруппе Е - Ss. anatum, give и другие (82,92,139).

Большое количество выделяемых сероваров патогенны для различных видов животных, птиц и человека.

Антигенную структуру сальмонелл, выделенных от птицы, изучали многие авторы: Н. Werner, В. Muller (1970 г.), Сох, A. Baxton (1977 г.), С. А. Brandly (1967 г.), L. Minor (1982 г.), М.М. Ахмедов, В.И. Макарочкина, А.Г. Малявин, Е.И. Выдрина (1962 г.), A.A. Кудряков, О.П. Алексеева, Н.Г. Кожемякин (1961 г.), И.С. Загаевский (1968 г.), Э. Ридал, В. Ридал, И.В. Шур (1970 г.), Б.Ф. Бессарабов, Н.К. Сушкова (1998 г.), И.И. Бальчунас (1983 г.), К.Ж. Гаджиев, А.Г. Халимов, В.Г. Зуев, В.А. Кузьмин (1995 г.), C.B. Ленев, Ю.А. Малахов, В.В. Шорохов (1996 г.), В.А. Ведерников (1997 г.), H.A. Рад- чук, Б.Н. Натенсон, Т.М. Сидорова (1998 г.) и другие (6,7,9,10,11,13,14,19, 25,26,39,41,48,50,54,55,60,66,76,96,115,117,139,156).

Серовариантный состав сальмонелл, выделенных от птицы, в том числе от кур, как показали многочисленные исследования, весьма разнообразен, однако чаще всего изолированные культуры сальмонелл относили к Salmonella gallinarum-pullorum, Ss. enteritidis, typhimurium, heidelberg, anatum, london, haifa, moskow, newlands, virchov, dublin и значительно реже к Ss. suipes- tifer, mission, sandiega и к другим.

Центром сотрудничества для реферации и исследований по сальмонеллам ВОЗ в 1990 году предложена классификация сальмонеллезов птиц по этиологии, согласно которой различают:

1) - сальмонеллез, вызванный S. gallinarum-pullorum (ранее именовавшийся как отдельная нозологическая единица - пуллороз-тиф) и S. enteritidis, относящиеся к серогруппе D;

2) - сальмонеллез, вызванный S. typhimurium, поражающий, в основном, водоплавающую птицу;

3) - сальмонеллез птицы, вызываемый не адаптированными к птице се- роварами сальмонелл (Ss. haifa, anatum, london и другие) (19).

Результаты собственных исследований

В ходе работы нами было проведено подробное изучение свойств выделенных сальмонелл, отдельные штаммы паспортизированы. Морфологические, тинкториальные и культуральные свойства изолятов характеризовались типичными для своего рода. Все выделенные сальмонеллы - грамнегативные палочки, длиной 2-5 мкм и шириной 0,7-1,5 мкм, не кислотоустойчивые и не формирующие эндоспор, образующие на МПА с голубоватым оттенком прозрачные колонии в S-форме диаметром от 2 до 5 мм, на агаре Эндо - бледно- розовые колонии, на среде Левина - прозрачные с фиолетовым блеском, на агаре Плоскирева - бесцветные, непрозрачные, на висмут-сульфит агаре - черные с металлическим блеском, на сальмонеллезно-шигеллезном агаре - черные колонии с желтоватым ободком.

Таким образом, большинство выделенных изолятов обладают характерными биохимическими свойствами для данных серовариантов сальмонелл: 8. егЛегШсНБ - подвижностью, сероводородообразованием, редукцией нитратов, сбраживанием глюкозы, арабинозы, маннита, сорбита, дульцита, мальтозы, отсутствием индолообразования, гидролиза желатина, сбраживания сахарозы, лактозы, инозита, салицина, малоната натрия; 8. аШпагит-р1111огит - неподвижностью, сбраживанием глюкозы, маннита, редукцией нитратов, отсутствием роста на цитратном агаре Симмонса, индолообразования, гидролиза желатина, сбраживания сахарозы, лактозы, инозита, сорбита, салицина, малоната натрия.

Многие изоляты высокочувствительны к энрофлоксацину, цефалексину, чувствительны к флубактину, резистентны к бензилпенициллину, мономици- ну, эритромицину, ампициллину, тилозину (кроме S. enteritidis № 15К, 23 С), линкомицину, рифампицину, карбенициллину. Изоляты S. enteritidis № 1JI, 2Л, ЗЛ, 4M, 5Б, 6Б, 7К, 14А, 15К, 160, 21 Я, S. gallinarum-pullomm №2Т g обладали высокой чувствительностью к левомицетину, остальные - средней или низкой чувствительностью.

Изоляты S. enteritidis № 1Л, 2Л, ЗЛ, 4M, 5Б, 6Б, 7К - высокочувствительны к стрептомицину, S. enteritidis № 8Б, 10Б, 11Н, 12В, 13В - к тетрациклину, S. enteritidis № 9Б, 10Б, 11Н, 12В, 13В - к канамицину.

К белкоспире ораль высокочувствителен изолят S. enteritidis №16 О; S. enteritidis №21Я и некоторые другие - слабочувствительны, остальные - резистентны. К неомицину отмечена высокая чувствительность у S. gallinarum- pullorum №5К g, большинство остальных изолятов неомициноустойчивы или низкочувствительны.

S. enteritidis № 20Б резистентен к большинству антибиотиков, слабочувствителен к энрофлоксацину.

На основании ферментативных свойств (положительные тесты на дуль- цит, мальтозу, возможность отрицательного теста на арабинозу) (82,104) изоляты №10 g и 4Т g можно отнести к серовару S. gallinarum, 2Т g и 5К g, несмотря на отрицательный результат ферментации арабинозы, - к S. pullorum. Однако, в связи с отсутствием серологической разделимости существующими наборами сальмонеллезных агглютинирующих сывороток, а также в связи с общепринятой объединенностью данных сероваров как фактора этиопато- генеза пуллороза-тифа кур и весьма схожих свойств микроорганизмов (незначительные отличия в некоторых биохимических свойствах не являются обязательными, и, следовательно, принципиальными), в настоящей работе мы используем единое название штаммам этих серовариантов - S. gallinarum- pullorum.

Эффективность применения бивалентного сальмофага против сальмо- неллеза энтеритидис и пуллороза-тифа кур в производственных условиях изучали на условно благополучных по сальмонеллезу птицефабриках Нижегородской области АОЗТ «Балахнинская птицефабрика» и ОАО «Птицефабрика «Ворсменская».

На базе АОЗТ «Балахнинская птицефабрика» Нижегородской области мы провели производственное испытание бивалентного сальмофага против сальмонеллеза энтеритидис и пуллороза-тифа кур на цыплятах трех- и пяти- суточного возраста согласно временному наставлению.

Для проведения исследований по принципу аналогов были сформированы две группы суточных цыплят кросса «Иза браун»: опытная (зал №1) в количестве 12080 голов, обработанных сальмофагом, и контрольная (зал №2) - 11300 голов, получавших первые 10 дней жизни энрофлоксацин по схеме хозяйства. Остальные ветеринарные обработки птицы (вакцинации, витаминизация) проводились в обеих группах согласно технологической схеме птицефабрики.

Выпойку цыплят бивалентным сальмофагом проводили по 0,5 дозы на цыпленка каждого из фаговых компонентов и по 0,25 млрд. мкр. кл. вакцинного компонента 8. е егШсНв в трех- и пятисуточном возрасте. За птицей опытной и контрольной групп вели ежедневное наблюдение до 100-дневного возраста (перевода из цеха молодняка), учет сохранности, прироста массы, причин падежа, а также бактериологические исследования патологического материала от всех павших цыплят в опытной и контрольной группах.

В 55-58-дневном возрасте птицы проводили ККРНГА с пуллорным антигеном на стекле с кровью 500 цыплят из каждой группы.

Отход цыплят опытной группы за срок наблюдения составил 311 голов, из них 153 цыпленка погибли по причине травматизации (в т.ч. грызунами), 75 - от мочекислого диатеза, у 56 отмечали нерассосавшийся желток, у 11 - расклев, 13 - клоациты, только у 3 павших цыплят отметили картину энтеро- бактериальной септицемии, а при бактериологическом исследовании у них выделили Е. coli. Бактерии рода Salmonella из трупов цыплят опытной группы не выделялись, т.о. заболеваемости и смертности от сальмонеллеза в группе птицы, обработанной бивалентным сальмофагом против сальмонеллеза энтеритидис и пуллороза-тифа кур, не было. Причины гибели цыплят опытной группы представлены на диаграмме 2.

Отход цыплят в контрольной группе за период наблюдения составил 561 голов, из которых 129 пали по причине травматизации, 91 - от мочекислого диатеза, 80 - с нерассосавшимся желтком, 29 - с расклевом, 26 - с клоацита- ми, у 206 трупов наблюдались поражения желудочно-кишечного тракта, печени, респираторных органов. При бактериологическом исследовании патологического материала у 162 цыплят была выделена S. enteritidis, из остальных 44 трупов цыплят с признаками септицемии выделили Е. coli (см. диаграмму 3).

Наибольший отход птицы отмечали на 7-13 сутки жизни преимущественно по причине травматизма и ранений цыплят крысами, а также по причине мочекислого диатеза и нерассосавшегося желтка. Заболеваемость саль- монеллезом в контрольной группе наблюдали с 11-дневного возраста птицы, случаи заболевания с выраженными признаками отмечали до 48 дня жизни, при этом наибольшая смертность от сальмонеллеза приходилась на 14-24- суточный возраст цыплят.

Проведенная ККРНГА среди птицы опытной группы положительно или сомнительно реагирующих не выявила. Среди молодняка кур контрольной группы из 500 проб в ККРНГА с пуллорным антигеном 12 были сомнительными. При бактериологическом исследовании из селезенки и репродуктивных органов убитой птицы, реагировавшей сомнительно в ККРНГА, была выделена 8. ег егШсНэ.

Исследование динамики роста средней живой массы птицы в опытной и контрольной группах (по групповому взвешиванию 80-90 цыплят в трех контрольных клетках каждого цеха (опытной и контрольной группы)) выявило более высокие приросты массы у цыплят в опытной группе, которые отмечали уже в 20-дневном возрасте, но более четко устанавливали к концу срока наблюдения (см. таблицу 21).

Белкина, Ирина Вадимовна